（一）紫外和可见光谱法紫外和可见光谱法是一种只在可见光及紫外光光谱应用范围内测量物质吸收辐射线的技术，应用十分广泛。分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。吸收光谱中，λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。分光光谱技术可用于如下几个方面：通过测定某种物质吸收或发射光谱来确定该物质的组成。...
2023-11-06 理论教育
生物化学实验指导
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微量凯氏定氮法测蛋白质含量详细阅读
天然有机物的含氮量常用微量凯氏定氮法来测定。在凯氏定氮仪中，2SO4与浓碱作用可分解放出氨。最后根据所用标准盐酸的量计算出待测液中的总氮量，进而计算出样品中粗蛋白质含量。先用低温加热，不久看到凯氏烧瓶内物质炭化变黑，并产生大量泡沫，此时要注意控制火力，勿使瓶内泡沫上升至瓶颈，否则将会影响样品测定结果。...
2023-11-06 理论教育
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实验发现：饱食和饥饿对肝糖原含量有何影响详细阅读
当动物饱食后，为防止血糖浓度过高，肝糖原合成增强，储备糖；饥饿时，为防止血糖浓度下降，肝糖原分解，释出葡萄糖。血糖浓度的恒定受激素信号的调节控制，如肾上腺素和胰岛素是作用相拮抗的两种激素，通过一系列酶促机制，调节血糖，影响肝糖原的含量；肾上腺素加速糖原分解，使血糖水平升高；胰岛素则促进糖原合成，是体内唯一的降低血糖的激素。...
2023-11-06 理论教育
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蛋白质性质实验-生物化学实验指导详细阅读
可用于蛋白质的定性或定量测定。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。...
2023-11-06 理论教育
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DNA含量测定实验结果详细阅读
脱氧核糖在酸性环境中脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，它与二苯胺试剂反应产生蓝色化合物，在595nm处有最大吸收，可用比色法测定。以DNA浓度μg为横坐标，A595为纵坐标，绘制标准曲线。根据所测得的吸光度对照标准曲线求得DNA的质量（μg）。...
2023-11-06 理论教育
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KH2PO4的制备及配制方法详细阅读
KH2PO4相对分子质量=178.05，1/15mol/L溶液含9.078g/L。...
2023-11-06 理论教育
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快速测定蛋白质浓度—实验11BCA法详细阅读
一个Cu+螯合2个BCA分子，工作试剂由原来的苹果绿色变为蓝紫色，在562nm处有高的光吸收值，并且化合物颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，据此可测定蛋白质浓度。BCA法定量测定蛋白质含量与其他方法相比有何优点及缺点？...
2023-11-06 理论教育
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层析技术在生物化学实验中的应用及原理解析详细阅读
层析法是利用不同物质理化性质的差异而建立起来的技术。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。起溶剂作用的液体或气体，用于协助样品平铺在固定相表面及将其从层析床中洗脱下来。运送系统 用来促使流动相通过层析床。分配系数是层析分离纯化物质的主要依据。上式是层析分离的热力学基础。同样，我们可以通过改变固定相的性质、组成，改变流动相的性质、组成，或者改变层析的温度，使α发生改变。...
2023-11-06 理论教育
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蛋白质含量测定：考马斯亮蓝染色法实验结果详细阅读
考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高敏感度，通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。该反应非常灵敏，最低检出量为1μg蛋白质，在1～1000μg蛋白质范围内呈良好的线性关系。于595nm波长处以0号管调零点，测定各管吸光度。计算绿豆芽中蛋白质含量。考马斯亮蓝G-250染色法定量测定蛋白质含量与其他方法相比有何优点及缺点？...
2023-11-06 理论教育
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酵母RNA的提取、鉴定和测量方法详细阅读
RN A在强酸和高温条件下可被降解为核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸等组分。在RN A的含量测定中，采用紫外吸收的方法测定所提取的RN A的含量，同时分别于260nm和280nm处测出A值，可以鉴定RNA的纯度。称量所得RNA粗品质量。取水解液进行下列组分的鉴定。同时测定280nm波长处吸光值，计算A260与A280比值，鉴定所提取酵母RNA的纯度。...
2023-11-06 理论教育
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生物化学实验规则手册详细阅读
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪器要洗净后置于实验柜中并排列整齐，将实验台面清理干净才能离开实验室。实验室内严禁吸烟。实验室内一切物品未经本室负责教师批准，严禁携带出室外。出借物品必须办理登记手续。离开实验室前应认真、负责地进行检查，严防发生安全事故。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作。...
2023-11-06 理论教育
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基因工程技术简介及基本原理详细阅读
（一）基因工程介绍和基本原理基因工程是现代生物学研究的重要手段，它是综合运用多项现代生物技术，实现DNA分子人工定向改造的一种技术方法。基因工程除了可以构建各种重组质粒外，还可以对基因组DNA进行改造，在基因组的特定位置点删除、替换、插入外源基因序列，构建各种基因工程菌。基因工程技术涉及以下步骤：从生物体的基因组中分离目的DNA序列（基因）。这通常包括DNA的纯化技术、酶促消化或机械切割等。...
2023-11-06 理论教育
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生物化学实验指导：高效碱性磷酸酶（AKP）分离纯化详细阅读
碱性磷酸酶是一种底物特异性较低，在碱性环境中能水解多种磷酸单酯化合物的酶，需要镁和锰离子为激活剂。碱性磷酸酶最适pH范围为8.6～10.0，主要存在于小肠黏膜、肾、骨骼、肝和胎盘等组织的细胞膜上。本实验采取有机溶剂分步沉淀法从兔肝或肾组织匀浆液中提取分离碱性磷酸酶。含有AKP的滤液再进一步用冷丙酮和冷乙醇进行分离纯化。碱性磷酸酶蛋白含量测定采用考马斯亮蓝染色法。...
2023-11-06 理论教育
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实验：糖化酶分离纯化方法详细阅读
糖化酶广泛分布于能直接以淀粉为营养源的所有生物体中。糖化酶的分离纯化实质是活性蛋白质的提纯过程。实验中选用工业糖化酶粗粉为原料。经离心分离获得的沉淀部分即为糖化酶的粗制品。经盐析法初步分离的糖化酶溶液含有大量的硫酸铵，会妨碍酶的进一步纯化，因此必须去除。脱盐后的糖化酶溶液经等电点沉淀、有机溶剂沉淀等处理可得到较纯的酶制剂。合并经检查不含的各管收集液，即为脱盐后的糖化酶液。...
2023-11-06 理论教育
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PCR技术：简介与原理详细阅读
聚合酶链式反应是20世纪80年代后期由K.Mullis等建立的一种体外酶促扩增特异DNA片段的技术。PCR是利用针对目的基因所设计的一对特异寡核苷酸引物，以目的基因为模板进行的DNA体外合成反应。延伸 70～74℃时，在TaqDNA聚合酶和4种脱氧核糖核苷三磷酸底物及Mg2+存在的条件下，以引物3′端为起始点沿着互补的单链模板进行DNA链延伸反应。...
2023-11-06 理论教育
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凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量详细阅读
该法广泛应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等，而测定蛋白质的相对分子质量也是它的重要应用之一。K a v是判断分离效果的一个重要参数，同时也是测定蛋白质相对分子质量的一个依据。以蛋白质相对分子质量的对数lgMr为纵坐标，Ve为横坐标绘制标准曲线。...
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