乙肝核心抗体检测及临床学意义

乙肝核心抗体的检测及其临床学意义

武汉东湖学院生命科学与化学学院　邓丽娟，骆淑媛，董　翠

乙型肝炎病毒(HBV)感染对人类健康构成了巨大威胁，是全球公共健康的主要问题之一。乙肝核心抗体是反映乙型肝炎病毒感染的重要指标之一。本文主要介绍了乙肝病毒感染的临床学特点、乙肝核心抗体检测的研究方法及临床检测意义。

乙型肝炎病毒（HBV）是世界上传染最广泛的致命病毒之一。我国是乙肝发病大国，目前被乙肝病毒感染的人群已超过1亿。乙肝病毒标志物检测是目前临床分析和判断病程及传染性的重要依据。乙肝核心抗体一般在发病早期即能在血液中检测出来，而且持续时间长，这是反映乙型肝炎病毒感染的重要指标之一。因此，检测乙肝核心抗体对疾病的诊断和治疗具有重要的意义。

一、乙肝病毒（HBV）感染的临床学特点

HBV感染会导致急性和慢性乙型肝炎。

一般来说，在HBV急性感染的一个月内，HBV DNA处于一个相对较低的水平，可以通过PCR技术检测到。6星期后，HBV DNA、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝表面抗原（HBsAg）滴度达到最高，此时，乙肝核心抗体（anti-HBc）出现，并可以在血清中保持较长时间不消失。约10—15星期后，血清中的丙胺酰基转氨酶（ALT）的水平开始上升，它是T细胞调节肝损伤的标志，此时血清中大多数的HBV DNA已被清除。

慢性乙型肝炎感染分为几个不同的时期，分别为免疫耐受期、免疫活性期、低复制期、高复制期。免疫耐受期特征表现为HBeAg和HBV DNA的水平较高，ALT水平正常，此时血清中可检测到HBsAg和anti-HBc。这一时期可能会持续20年左右，不过出于某种原因，患者可能从免疫耐受期转而进入免疫活性期。在免疫活性期，HBV DNA滴度较低，但肝损伤更严重，有可能会恶化为肝硬化。当然，随着血清中游离的HBeAg被清除、anti-HBe形成，病患也有可能从免疫活性期转而进入低复制期。在低复制期内，血清中的HBV DNA低于可检测水平，ALT水平正常，肝的慢性炎症加重，这种低复制期可以持续终身。但是，不同的病人，尤其是经免疫抑制治疗的病人，也有可能会由低复制期转为高水平的DNA复制期。

二、乙肝核心抗体（anti-HBc）检测的临床学意义

对乙型肝炎的病原学诊断，最常用的是乙肝病毒血清标志物（HBVM）的检测。HBVM主要包括乙肝表面抗原（HBsAg）、乙肝表面抗体（anti-HBs）、乙肝核心抗体（anti-HBc）、乙肝e抗原（HBeAg）、乙肝e抗体（anti-HBe）、HBV-DNA及DNA多聚酶（DNA-p）等。通过检测HBVM可以间接地多角度了解患者HBV感染、复制以及病情恢复情况。

在HBVM中，anti-HBc较为独特。anti-HBc是除HBV感染的最初阶段外，其他所有阶段均能检测到的一种血清标志物。这个标志物在HBsAg消失后的急性HBV感染期和慢性HBV携带期均存在，因此它是现在及过去曾感染HBV的指标；同时，anti-HBc还是窗口期（HBsAg不能检测到而anti-HBs还未出现的时期）仅有的、可检测到的血清标志物；此外，由于HBV感染后，anti-HBc 在血清中长期存在，因此对anti-HBc的检测为特定人群的乙肝流行性动态提供了最好的信息。

然而，对anti-HBc进行检测的意义并不仅在于此。根据来自美国国家卫生机构调查研究结果表明，anti-HBc的筛选对于预防输血后HBV感染有着重要意义。预防乙型肝炎病毒以及其他通过输血传播的传染性疾病，其主要依赖于对潜在供血者血清中传染性疾病标志物的筛选。研究表明，要降低由输血导致的HBV的传播，除了使用现在最可信的血清学检测方法对HBsAg进行检测之外，对乙肝核心抗体（anti-HBc）的检测也是必不可少的。目前，对anti-HBc的检测已经被运用到更特殊的方面，譬如人们发现一些HBV变异株在HBsAg检测中表现为阴性，但是其anti-HBc却能被检测到。当然，对于anti-HBc在这一方面的作用现在仍颇受争议[7]。但是不可否认的是，在HBV感染的高发地区，对anti-HBc检测的有用性进行慎重评估是十分重要的。

总体来说，可提供的安全筛选政策应是基于对经济负担的分析，以及对由于丢弃anti-HBc阳性的血制品而导致血制品短缺的可能性的分析之上的。首先，尽管目前对血制品的质检水平有了很大的提高，但输血后感染HBV的风险仍然存在；其次，在血清检测中，anti-HBc呈阳性是供血者延期供血的主要原因。事实上，研究数据表明，在一些大型血库，anti-HBc呈阳性的血制品在所丢弃的血制品中占的比例是最高的；而且，即使特异性更高的anti-HBc检测方法被广泛应用，因为anti-HBc阳性是供血者推迟供血的主要原因，所以，因anti-HBc阳性而被丢弃的血制品将仍然存在。有鉴于此，在一些国家，anti-HBc的筛选方法通过使用分子生物学标志物来进行评估，即如果仅在anti-HBc呈阳性的供血者血清中检测到HBV-DNA，那么此血清检测在证实供血者的血液具感染性方面是有意义的。但是，由于这些结果是依赖于技术的使用以及受地域限制，所以这些研究并不能提供明确的结论。最近的研究数据表明，仅就anti-HBc阳性的血制品进行检测，其HBV-DNA检出范围是0.8%—23.4%。然而在一些报告中，约80%的anti-HBc阳性供血者，其anti-HBs呈阳性。显然，这是HBV自然感染完全恢复的标志。从这个意义上，这些人群是非感染人群，因此适合供血。不过，运用这种更复杂的检测手段对HBV高发区以及第一次供血者进行病毒筛选的综合效果仍然需要进一步确证。

三、乙肝核心抗体检测方法的研究

到目前为止，直接针对anti-HBc的检测方法主要分为三大类，分别为免疫吸附血凝试验（IAHA）、酶联免疫吸附检测（ELISA）技术和放射免疫检测（RAI）技术。以上三者各有特点：IAHA检测方法灵敏度不高，造成漏检现象较为严重；RIA技术具有敏感度高、特异性强的优点，但成本高、操作复杂且受同位素半衰期的影响，所以在推广应用上有一定的局限性； ELISA技术敏感度高，价格相对低，目前国内外应用较为广泛。

目前，最常采用的anti-HBc检测方法是ELISA中的竞争性抑制法，其原理为标本中的抗体和一定量的酶标抗体竞争与固相抗原结合。标本中抗体量越多，结合在固相上的酶标抗体愈少，因此呈阳性反应色浅于阴性反应。洗涤除去抗原中的杂质，然后再加标本和酶标抗体进行竞争结合反应。此检测方法的优势在于，当抗原材料中的干扰物质不易除去，或不易得到足够的纯化抗原时，可用此法检测特异性抗体。但是研究表明，ELISA检测anti-HBC存在较多的影响因素。它对极低水平表达的anti-HBc样品一般难以检出；同时，正是因为包被抗原的纯度不高，所以可能会导致非特异性反应，从而出现假阳性检测结果。此外，在检测过程中因先加入标本，再加酶标anti-HBc，通常会导致标本的anti-HBc优先结合HBcAg，从而使样品anti-HBc与酶标anti-HBc产生“不公平竞争”。当成批样品测定时，这种时间差异的加大会使得“不公平竞争”加剧，进而产生前后检测结果不一的问题。(www.chuimin.cn)

总之，因为anti-HBc具有独特的临床学和病毒学特点，所以对anti-HBc的筛选具有重要的临床学和流行病学意义。然而，目前针对乙肝核心抗体的检测技术均有优缺点，因此开发快速、敏感和特异的检测技术将是未来乙肝核心抗体检测技术的发展方向。

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