酶是在活细胞中合成并在胞内或胞外介质中存在的。胞内酶在细胞内存在部位和结合状态比较复杂,因而抽提难度较大。酶的抽提目的是将尽可能多的酶或尽可能少的杂质从原料组织和细胞中引入溶液,以利于酶的纯化。但此法用于酶的大量提取有一定局限性。经丙酮处理的细胞干粉称为丙酮粉。丙酮还能除去细胞膜部分脂肪,更有利于酶的提取。根据酶在细胞内结合状态以及其溶解程度,酶的抽提可分为水溶法和有机溶剂法两种。......
2023-11-22
酶经提纯后,酶活力提高,但这并不是酶的纯度标准。为了了解所获得的样品是否均一纯净,还要进行纯度鉴定。酶均一纯净性的鉴定主要有以下几种方法。
1.电泳法
电泳法分辨率高,能在电泳谱带上分辨其是否均一。此法包括醋酸纤维素薄膜电泳、聚丙烯酰胺不连续电泳和聚焦电泳,特别是后两者有极高的分辨力。聚焦电泳不仅分辨率高,而且当有杂质存在时,从谱带位置还可了解杂蛋白的解离性质,有利于采取进一步的纯化措施。
2.超离心法
在高于60000r/min的离心力场情况下观察离心谱带,根据沉降峰的情况进行具体分析判断。
3.免疫学法
纯化的酶样品在琼脂胶上与相应的抗体进行免疫反应,然后进行分析比较。
为适应各种需要,并考虑到经济和应用效果,酶制剂有如下几种剂型。
(一)液体酶制剂
液体酶制剂包括酶液和浓缩酶液。一般需要经过除去菌体等杂质后,直接纯化制成或加以浓缩。比较经济,但要加稳定剂,然后出厂。
(二)固体粗酶制剂(www.chuimin.cn)
固体粗酶制剂有的是发酵液经过杀菌后直接浓缩干燥制成;有的是发酵液滤去菌体后喷雾干燥制成;有的则加有淀粉等填充料。这些制剂多用于皮革软化脱毛、水解纤维素等方面。
固体粗酶制剂便于运输和短期保存,成本也不高。
(三)食品级固体酶制剂
食品级固体酶制剂对纯度不一定要求严格,但强调安全、卫生,要严格按照国家制定标准执行。一般采用乙醇沉淀提取,然后再喷雾干燥制成粉状成品。
表7-10 无锡酶制剂产品规格、剂型及其特性
续表
(四)纯酶制剂
纯酶制剂包括结晶酶在内,通常用作分析试剂或用作医疗药物,要求有较高的纯度。用作分析工具酶时,除了要求没有干扰作用的杂酶存在外,还要求单位质量的酶制剂中酶活力达到一定单位数。用作基因工程的工具酶要求不含非专一性的核酸酶,或完全不含核酸酶。作为蛋白质结构分析对象的酶必须“绝对的”纯净,而注射用的医用酶则应设法除去热源类物质。
无锡星达生物工程公司出品的酶制剂产品规格、剂型及其特性如表7-10所示。
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2023-11-22
因而,各种各样的发酵酿造食品均与酶的应用紧密相关。在生产中采用黑曲糖化酶、真菌β-淀粉酶和脱支酶等。目前此法仍在试验阶段,采用的设备为固定床和流化床生物反应器。在酒精生产中,淀粉质原料的蒸煮是一个关键工序。在酿造生产中此酶适用于蒸煮前的调浆工序,其最适温度为90~105℃,pH为5.5~7.0。酶法应用于白酒、黄酒、食醋和酱油的生产中,主要在加曲糖化过程中采用外加糖化酶,可加速糖化工序,便于缩短生产周期。......
2023-11-22
对酶促作用的影响同抑制作用相反,许多酶促反应必须有其他适当物质存在时才能表现酶的催化活性或加强其催化效力,这种作用称为酶的激活作用,引起激活作用的物质称为激活剂。至于无机阴离子对酶的激活作用,在实践中也是常见的现象。若酶原被具有活力的同种酶所激活,则称为酶的自身激活作用。而酶的活性部位往往只能作用于底物的一种解离状态。当温度超过酶的最适温度时,酶蛋白就会逐渐产生变性作用而减弱甚至丧失其催化活性。......
2023-11-22
20世纪70年代初实现了DNA重组技术,极大地推动着食品科学与工程的发展,也促使酶学研究进入新的发展阶段。现代食品酶学发展有如下几个新的突破:1.酶及细胞固定化技术的开发应用作为一种催化剂,在催化过程中自身不发生变化,可以反复使用。酶及产酶细胞的固定化技术从酶学理论到生产实践得到迅速的发展,引起食品、发酵工业一场大变革。......
2023-11-22
酶的催化反应按其底物数可分为单底物和多底物的催化作用,两者反应系统的动力学规律不完全相同。所谓多底物催化是指两个或两个以上的底物参与反应,其动力学方程相当复杂,数学推导也十分烦琐。多底物酶促反应历程复杂,包括连续性机制和非连续性机制。......
2023-11-22
几乎所有的动植物酶都可以从微生物细胞中获得,而且微生物容易变异,可以通过菌种改良,进一步提高酶的产量。因此,工业酶制剂几乎都用微生物发酵法进行大规模制造的。产酶的微生物主要是细菌、真菌、霉菌和放线霉等。......
2023-11-22
酶的分离、纯化属生物工程的下游过程。酶的产量是以活力单位表示的,在整个分离过程中每一步都需要进行比活力和总活力的检测、比较。只有这样才能确定酶的分离、纯化程度。要了解酶的实际纯度,尚需采用电泳等测定方法。一般试剂级及药用级用酶纯度要求高,则采取提纯倍数高的方法。而食品级酶在整个分离、纯化工程中要注意卫生,防止污染,各方面均需综合考虑。......
2023-11-22
酶促反应速度和普通化学反应一样,可用单位时间内底物减少量或产物增加量来表示。反应速度即图中曲线的斜率。酶反应速度,是对初速度而言。在一定条件下,酶所催化的反应速度称为酶活力。由于反应底物或产物可显示不同吸收光谱,光吸收与浓度成正比,光吸收改变的速率与酶活力也成正比,因而可用分光光度计来进行测定酶反应的情况。......
2023-11-22
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