抽提的酶液是否需要进一步经过纯化，要视其应用的要求。食品工业应用的酶如果粗酶液已达到食品级标准要求，特别是卫生指标，也无需进一步纯化。然而，应用于医药、化学试剂级的酶液必须进一步纯化。因此，酶的纯化目的是把粗抽提酶液采用科学纯化方法制备成纯度高的酶制品。酶的纯化方法很多，现根据酶的溶解度、分子大小、电离性质、稳定性和亲和力等方面性质，其方法分述如下。......
2023-11-22
食品酶学导论：高效分离纯化酶
【摘要】：酶的分离、纯化属生物工程的下游过程。酶的产量是以活力单位表示的，在整个分离过程中每一步都需要进行比活力和总活力的检测、比较。只有这样才能确定酶的分离、纯化程度。要了解酶的实际纯度，尚需采用电泳等测定方法。一般试剂级及药用级用酶纯度要求高，则采取提纯倍数高的方法。而食品级酶在整个分离、纯化工程中要注意卫生，防止污染，各方面均需综合考虑。
酶的分离、纯化属生物工程的下游过程（down stream process）。酶的产量是以活力单位表示的，在整个分离过程中每一步都需要进行比活力和总活力的检测、比较。只有这样才能确定酶的分离、纯化程度。
①酶活力（enzyme activity）：酶活力是指酶催化反应的能力，它表示样品中酶的含量。1961年国际酶学会规定，1min催化1μmol分子底物转化的酶量为该酶的一个活力单位（国际单位IU），而且规定反应温度为25℃，在具有最适底物浓度、最适缓冲离子强度和pH的条件下进行。
②酶的总活力：样品的全部酶活力。
总活力=酶活力×总体积（mL）
或
总活力=酶活力×总重量（g）
③比活力（specific activity）：比活力是指单位蛋白质（毫克蛋白质或毫克蛋白氮）所含有的酶活力（U/mg蛋白）。比活力是酶纯度指标，比活力越高表示酶越纯。但是，比活力仍然是个相对酶纯度指标。要了解酶的实际纯度，尚需采用电泳等测定方法。(www.chuimin.cn)
④回收率（recovery percent）：回收率是指提纯前与提纯后酶的总活力之比。它表示提纯过程中酶的损失程度，回收率越高，其损失越少。
⑤提纯倍数：提纯倍数是指提纯前后两者比活力之比。它表示提纯过程中酶纯度提高的程度，提纯倍数越大，提纯效果越佳。
以上分离、提纯过程有关参数，对于从事酶学研究及应用十分重要。由于酶与其他蛋白质一样，存在不稳定性，在操作过程中要特别注意防止酶的变性失活。同时，对食品级酶，更要注意安全、卫生，防止重金属、有害化合物的污染。
从表7-1可知，随着分离、提纯过程，酶的比活力越来越高，提纯程度越来越高，其提纯倍数也越来越大，而其总活力、回收率相对降低。
表7-1 从E·coli中分离、提纯天冬酰胺酶
酶的分离、提纯程度与其应用有关。一般试剂级及药用级用酶纯度要求高，则采取提纯倍数高的方法。工业用酶对纯度要求较低，其成本价格显得重要，甚至有时采用粗酶液。而食品级酶在整个分离、纯化工程中要注意卫生，防止污染，各方面均需综合考虑。
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