花卉组培程序与其他植物一样，包括以下程序。生长素和细胞分裂素的种类和浓度因花卉种类、品种以及诱导、增殖、生根等不同阶段而有所不同，经过愈伤组织和不定芽的诱导、分化及丛芽增殖培养，形成许多芽丛，最后将达到生根质量标准的小苗进行生根培养，形成具有根、茎、叶的完整小植株。......
2023-11-20
高效植物组培快繁技术
【摘要】：目前，仙客来多用种子进行繁殖，且种子多为杂交种，不利于优良性状的保持。本试验通过不同消毒时间处理仙客来叶片，确定最佳的消毒时间；通过加入不同的激素处理，筛选适宜的诱导培养基；比较活性炭和抗坏血酸两种方法，确定哪种方法可以更好地防止仙客来褐化。现采用仙客来的幼嫩叶片为外植体。由上述结论可以看出，当NAA浓度为1.0、BA浓度为2.0时，愈伤组织诱导率最大，为仙客来外植体诱导愈伤组织培养基的最佳配方。
目前，仙客来多用种子进行繁殖，且种子多为杂交种，不利于优良性状的保持。组织培养能够保持植物的优良性状并且有很高的繁殖率。利用组织培养的方法建立优系仙客来的无性繁殖体系，进行种苗的工厂化育苗生产，具有恢复和保持种性、快速大量繁殖优系品种的优势，可以从根本上解决仙客来生产上的种苗质量问题。
本试验通过不同消毒时间处理仙客来叶片，确定最佳的消毒时间；通过加入不同的激素处理，筛选适宜的诱导培养基；比较活性炭和抗坏血酸两种方法，确定哪种方法可以更好地防止仙客来褐化。
（一）外植体培养
1.试验材料
采用种子无菌播种，获得无菌小苗后，取叶及小块茎作为接种材料，这样外植体污染少，易于成功。采用大植株的叶及块茎作为外植体，同样可以。现采用仙客来的幼嫩叶片为外植体。
2.试验方法
（1）外植体不同消毒时间的处理。配制MS培养基加蔗糖25 g/L、琼脂6.5 g/L，调节pH值至5.6～6.0，并将其分装、封口，和接种用的实验器具一起进行高压灭菌后接种。
本试验采用酒精表面灭菌和升汞灭菌进行接种前的消毒处理。
将升汞消毒时间设置为4个梯度：4、6、8、10 min，将叶片分组后分别进行不同时间的消毒处理。
将处理后的叶片切成1 cm×1 cm的小块接种到培养基上。1个月后统计外植体不同消毒时间后的褐化率、污染率、成活率，比较得出最佳消毒时间。
重复3次，取平均值。
表10-7-1 外植体不同消毒时间的处理（0.1%升汞）
从表10-7-1可以看出，升汞的消毒时间对外植体消毒效果有明显的影响，随着消毒时间的延长，污染率降低。叶片用升汞消毒4、6、8、10 min，污染率分别为85%、50%、40%和10%。从表10-7-1还可以看出，外植体的褐化与升汞的消毒时间密切相关，升汞处理时间为4、6、8、10 min，褐化率分别为10%、25%、50%、55%，可见，随着消毒时间的延长，污染率下降，但褐化率升高。通过比较，可得出仙客来叶片外植体的最佳消毒时间为6 min。
（2）适宜外植体培养基的筛选。
①NAA的筛选：配制MS培养基加蔗糖25 g/L、琼脂6.5 g/L，以1.5 mg/L BA为基数，设置不同浓度梯度的NAA：0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L，调节pH值至5.6～6.0，并将其分装、封口，和接种用的实验器具一起进行高压灭菌后接种。
利用试验中得出的最佳消毒时间6 min进行接种前的灭菌处理。将处理后的叶片切成1 cm×1 cm的小块接种到培养基上。1个月后统计愈伤组织诱导率，根据外植体的生长情况确定最佳的NAA浓度。
重复3次，取平均值。
表10-7-2 以1.5 mg/L BA为基数愈伤组织诱导率
(www.chuimin.cn)
由于BA是植物形成愈伤组织的必需激素，所以在固定了BA浓度时，由表10-7-2可以看出，当NAA浓度为0时，愈伤组织也是生长的，不过诱导率只有10.5%。在NAA浓度为1.0 mg/L时，愈伤组织诱导率达到最大值72.5%，效果也最明显。
②BA的筛选：在筛选出的最佳NAA浓度1.0 mg/L的培养基中添加不同浓度梯度的BA（0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mg/L），调节pH值至5.6～6.0，并将其分装、封口，和接种用的实验器具一起进行高压灭菌后接种。
将处理后的叶片切成1 cm×1 cm的小块接种到培养基上。1个月后统计愈伤组织诱导率，根据外植体的生长情况确定最佳的BA浓度。
重复3次，取平均值，并比较3种培养基中愈伤组织的增殖情况。
表10-7-3 愈伤组织诱导率
由表10-7-3可以看出，在固定NAA浓度为1.0时，当BA浓度为0时，愈伤组织也是生长的，不过成功率非常小，只有11.5%。在BA浓度为2.0 mg/L时，愈伤组织诱导率达到最大值59.9%，效果也最明显。
由上述结论可以看出，当NAA浓度为1.0、BA浓度为2.0时，愈伤组织诱导率最大，为仙客来外植体诱导愈伤组织培养基的最佳配方。
（二）增殖培养
仍以MS为基本培养基，添加3种组合的激素，即NAA 1 mg/L、BA 2 mg/L，NAA 1 mg/L、BA 4 mg/L和NAA 1 mg/L、BA 8 mg/L，将诱导出的愈伤组织分切成大小一致的小块接入培养基。增殖效果见表10-7-4。
表10-7-4 愈伤组织增殖效果
实验结果表明，随着BA浓度的增大，愈伤组织的增殖率也增大，达到最大值70.9%；随着BA浓度的增大，褐化率也不断增大，由最初的25.3%上升到53.4%。所以，最佳BA浓度以4 mg/L为最好。
（三）分化培养
诱导、增殖培养后，产生大量的愈伤组织，将上述愈伤组织转入分化培养基上，分化培养基中不加入NAA，培养20 d后，叶片愈伤组织上分化出丛生苗。块茎愈伤组织的瘤状体可以自行分离而成单独球体，其上可分化出小苗。
（四）生根培养
切开丛生苗，将单独的球体选出，接种到MS+IBA 0.5 mg/L的生根培养基上，20 d后可在苗的基部形成幼根，30 d后根长2～6 mm，有1～10条。球茎愈伤组织生长缓慢，不易生根。
（五）驯化移栽
将已生根的组培苗进行1周驯化后，在温室中进行移栽，移栽时，从试管中取出生根的小苗，用0.2%多菌灵轻轻洗掉根部粘着的培养基，要清洗干净，以防残留培养基滋生杂菌，同时避免伤根。移植时用一根筷子粗的竹签在基质中插一小孔，然后将小苗插入，注意幼苗较嫩，防止弄伤，栽后把苗周围基质压实，栽前基质要浇透水，栽后轻浇薄水。再将苗移入高湿度的环境中，保证空气湿度达90%以上，后逐渐过渡到温室自然环境，移栽成活率在80%以上。
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