（二）真菌污染的症状及引起的原因培养基和培养物上长霉，即真菌污染现象。已污染的组织培养瓶要经高压灭菌后再清洗，防止污染源扩散。......
2023-11-20
康乃馨脱毒及快繁技术研究成果
【摘要】：通过茎尖分生组织培养，能够获得无病毒苗，以保持优质康乃馨种苗性状的稳定性。表10-2-1不同培养基对康乃馨茎尖生长分化的影响结果表明：康乃馨茎尖分化培养基以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L较好。康乃馨性喜光，好温凉。康乃馨继代增殖以茎段伸长和产生芽丛比较好，繁殖速度快，变异性小，增殖率高。在培养基中加入20万单位青霉素可减轻玻璃化现象。
康乃馨是石竹科石竹属多年生植物，花色艳丽，气味芳香，开花时间长，装饰效果好，是世界上最畅销的切花之一，具有较高的经济价值。由于受病毒病侵害，植株矮化，花朵变小，产生斑点，退色甚至不开花，影响切花产量和质量。通过茎尖分生组织培养，能够获得无病毒苗，以保持优质康乃馨种苗性状的稳定性。
图10-2-1 康乃馨组培苗
1.茎尖脱毒
（1）材料的选取、表面灭菌：选择品种优良、花色纯正、花形好的健壮植株做外植体。选取顶芽及时处理，逐层剥去叶，留顶部未展开的2～3对叶，在浓洗衣粉液中清洗，然后用自来水反复冲洗后，在超净工作台上切割2 cm带顶茎段，用0.1%升汞溶液灭菌8～10 min，无菌水冲洗4～5次。
（2）茎尖剥离：在超净工作台上无菌条件下用镊子及解剖刀剥去幼叶，露出顶端生长锥，移入50倍解剖镜下，用解剖刀切下0.2～0.5 mm的茎尖并带上1～2个叶原基，迅速（1～2 s）接入已准备好的培养基上。选用MS做基本培养基，附加2种激素6-BA、NAA，设置6-BA 0.05、0.1、0.5、1.0、1.5 mg/L 5个浓度梯度，NAA 0.01、0.05、0.1、0.5、1.0 mg/L 5个浓度梯度，组合成配方。康乃馨茎尖生长状况见表10-2-1。
表10-2-1 不同培养基对康乃馨茎尖生长分化的影响
结果表明：康乃馨茎尖分化培养基以MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L较好。
（3）培养：接好的茎尖放到培养室中培养。康乃馨性喜光，好温凉。培养过程中控制培养室的温度在20℃～25℃，光照强度在800～2000 lx，光照时间以每天12～16 h为宜。5 d左右芽点开始转绿，1周后体积膨大，1个月左右开始展叶。再转接到相同的培养基上，50 d左右长成2～3 cm的小苗丛。当达到一定数量后，取出部分进行严格的病毒检测，经鉴定脱毒的试管苗可以进一步继代增殖。
2.快速繁殖
（1）继代增殖：试验过程中采用了两种培养基。
①固体培养基：传统的固体培养基，在培养基中加入琼脂起固定作用。康乃馨继代增殖以茎段伸长和产生芽丛比较好，繁殖速度快，变异性小，增殖率高。20～30 d可继代一次，增殖率为3～5倍。增殖固体培养基设置5种配方，各配方下生长状况见表10-2-2。
表10-2-2 不同浓度6-BA、NAA对康乃馨芽丛分化的影响(www.chuimin.cn)
结果表明：康乃馨继代增殖配方以MS+BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L较好，苗分化速度快而且生长健壮。
②固—液两相培养基继代培养：在固体培养的基础上，改进培养基状态——培养基中用粗粒状珍珠岩代替琼脂起固定作用，然后直接加入适宜的培养液，经过消毒灭菌后接种康乃馨试管苗。观察结果表明，在此培养基上试管苗生长速度快，苗健壮，增殖倍率高。
（2）生根培养：切去3 cm左右的无根嫩茎，接种到壮苗生根培养基上。1周左右生根，10 d左右生根率达90%～100%。生根培养基配方及效果见表10-2-3，以1/2 MS+NAA 0.1～0.5 mg/L或1/2 MS+IBA 0.1～0.5 mg/L效果最好。也可采用固—液两相培养基进行生根培养，试管苗吸收营养快，生根快。移栽过程洗根容易，大大提高了移栽速度和移栽成活率。
表10-2-3 不同浓度IBA、NAA对康乃馨生根的影响
（3）炼苗与移栽：试管苗生根后，连同瓶苗一起移到炼苗室，适当控制光照、温度、湿度，并逐渐打开瓶盖注入自来水进行炼苗。1周后，开始移栽。移栽时，取出的试管苗首先用0.1%多菌灵溶液清洗根部，然后栽入经过消毒灭菌的基质中。选用移栽基质时，在穴盘底部装营养基质（田园土：粗沙=1：1），上部2～3 cm装珍珠岩。
移栽后最初几天要求保持高湿（相对湿度90%～100%），可以在大棚内搭设小拱棚，每天喷雾3～4次，而且注意通风和防治病菌，可用0.1%多菌灵溶液定期（每周1～2次）喷洒。逐渐降低空气湿度，最终过渡到可在正常的温室或自然条件下生长。
移栽过程中以较高强度的散射光为好，逐渐增加光照强度。温室温度控制在18℃～20℃为宜。1个月后，进行第二次移栽，实行正常管理。移栽成活率可达95%以上。
3.试验结果分析
（1）康乃馨茎尖大小与接种成活率成正比，与脱毒效果成反比。茎尖越大越容易剥离，成活率越高，但脱毒率越低。一般用0.3～0.5 mm茎尖接种，成活率达80%左右，脱毒率达50%左右。
（2）康乃馨试管苗在培养过程中，如果条件不适宜，如温度高、光照弱、光照时数少，会产生玻璃化现象。所以加强光照、延长光照时数、降低培养室温度，可以克服玻璃化现象。在培养基中加入20万单位青霉素可减轻玻璃化现象。
（3）在1/2 MS+NAA 0.1～0.5 mg/L或1/2 MS+IBA 0.1～0.5 mg/L培养基上诱导生根时间短，根条数适中，生根率为95%～100%。
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2023-11-20
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