植物组培快繁过程一般可分为四个阶段，即初代培养、继代培养、生根培养和组培苗的驯化移栽。一般木本植物、较大的草本植物以茎段比较适宜，因为茎段取材容易，可在一定的培养基上通过萌发出侧芽或产生不定芽成为进一步繁殖的材料。接种后培养基上如出现微生物污染会导致培养失败。将由外植体或愈伤组织产生的胚状体进一步切割，转接于增殖培养基中，扩大胚状体数量，常用液体振荡培养方式。......
2023-11-20
单倍体植株染色体加倍：植物组织培养快繁技术成果
【摘要】：而花粉植株的发生途径、愈伤组织继代培养时间长短的影响尤为显著，由花粉胚状体直接成苗或由第二代愈伤组织分化成苗，单倍体频率高，在烟草中几乎为100%；随着愈伤组织继代次数、继代时间的增加，二倍体的比例增加。
（一）花粉植株的倍性
由花药培养产生的花粉植株不仅有单倍体，还有二倍体、三倍体及非整倍体。不同倍性花粉植株的来源如下。
（1）花粉细胞核内发生有丝分裂或畸变，可产生二倍体、四倍体。
（2）花粉细胞分裂并出现核融合，可产生三倍体、五倍体。
（3）花药壁或花药内部组织（如绒毡层）细胞同时发育，可产生二倍体。
植物种类、接种花药的花粉发育时期、培养基中生长调节物质的种类与浓度等都影响花粉植株的倍性。而花粉植株的发生途径、愈伤组织继代培养时间长短的影响尤为显著，由花粉胚状体直接成苗或由第二代愈伤组织分化成苗，单倍体频率高，在烟草中几乎为100%；随着愈伤组织继代次数、继代时间的增加，二倍体的比例增加。
（二）单倍体植株染色体加倍的方法
单倍体植株营养体瘦小，只含一套染色体而不能进行正常的减数分裂，不能开花结实，需经加倍处理使之成为纯合二倍体，在育种上才有利用价值。(www.chuimin.cn)
1.自然加倍
通过花粉细胞核有丝分裂或核融合，染色体可自然加倍，从而获得一定数量的纯合二倍体，其优点是不会出现畸形，不足之处是随机性强，难以掌握和利用。
2.人工加倍
人工加倍指用秋水仙素处理单倍体植物，使染色体加倍的方法。处理方式有用秋水仙素浸苗、处理愈伤组织，或用含0.4%秋水仙素的羊毛脂涂抹田间单倍体植株的顶芽、腋芽等，处理时间和秋水仙素的浓度视植物材料而定。通常浸苗处理，禾本科植物是在移栽于土壤前，用0.05%～0.1%秋水仙素浸分蘖节下72 h（弱光或暗处进行，以防秋水仙素分解）；双子叶植物宜用0.2%～0.4%秋水仙素浸试管苗24～25 h，浸后用无菌水冲洗干净，再转入新的培养基。这种方法可使烟草加倍频率提高38%，水稻、小麦处理植株50%～70%可结实。小麦花粉愈伤组织用250 mg/L秋水仙素处理，其再生花粉植株结实率可达90%以上。
3.愈伤组织再生
将单倍体植物（孢子体）的茎段、叶柄、根茎切下，置于适宜的培养基上使之发生愈伤组织，反复继代后再将愈伤组织转移到分化培养基上，即可获得较多二倍体植株。这一方法也叫组织创伤法，利用了愈伤组织细胞有丝分裂频率高、长期培养能提高其自动加倍率的特性。这种方法可使烟草F1花粉植株加倍频率达60%。
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2023-11-20
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