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植物组织培养快繁技术:指示植物法简介

【摘要】:指示植物法是利用病毒在一些植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物称为指示植物,又称鉴别寄主。图6-3-1植物汁液涂抹法病毒鉴定示意图指示植物法最早是美国病毒学家Holmes于1929年发现的。病毒的寄主范围不同,所以应根据不同的病毒选择适合的指示植物。此外,所选指示植物应一年四季都易栽培,且在较长的时期内保持对病毒的敏感性,容易接种,并在较广的范围内具有同样的反应。

指示植物法是利用病毒在一些植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法。这些对病毒反应敏感、症状特征显著的植物称为指示植物,又称鉴别寄主。指示植物法只能鉴别靠汁液传染的病毒。

图6-3-1 植物汁液涂抹法病毒鉴定示意图

指示植物法最早是美国病毒学家Holmes于1929年发现的。他将感染TMV的普通烟叶的粗汁液和少许金刚砂相混,然后在心叶烟叶片上摩擦,2~3 d后叶片上出现了局部坏死斑。在一定范围内,枯斑与侵染性病毒的浓度成正比。这种方法条件简单,操作方便,故一直沿用至今,仍为一种经济而有效的鉴定方法。该法不能测出病毒总的核蛋白浓度,只能测出病毒的相对感染力。

病毒的寄主范围不同,所以应根据不同的病毒选择适合的指示植物。此外,所选指示植物应一年四季都易栽培,且在较长的时期内保持对病毒的敏感性,容易接种,并在较广的范围内具有同样的反应。指示植物一般有两种类型:一种是接种后产生系统性症状,病毒可扩展到植物非接种部位,通常没有局部病斑明显;另一种是只产生局部病斑,常由坏死、褪绿或环状病斑构成。(www.chuimin.cn)

图6-3-2 草莓指示植物小叶嫁接病毒鉴定示意图

接种时从被鉴定植物上取1~3 g幼叶,在研钵中加10 mL水,加少量或等量0.1 mol/L磷酸缓冲液(pH 7),研成匀浆。再在汁液中加入少量500~600目金刚砂作为指示植物叶片的摩擦剂,使叶面产生小的伤口,而不破坏表面细胞。用棉球蘸取汁液在叶面上轻轻涂抹2~3次进行接种,后用清水冲洗叶面。接种工作应在防蚜虫温室中进行,温度保持在15℃~25℃。接种后2~6 d,即可观察是否有典型症状出现。木本多年生果树及草莓等无性繁殖的草本植物,采用汁液接种法比较困难,因而通常采用嫁接接种的方法,即以指示植物做砧木,以被鉴定植物做接穗,常用劈接法。