植物组织培养技术：无菌操作步骤详解

2023-11-20 理论教育版权反馈

【摘要】：瓶盖或棉塞始终拿在手上，这时再将管口在灯焰上旋转，使其充分灼烧灭菌，主要注意管口附近，包括管口内表面，然后用右手拇、食、中指拿镊子夹一块外植体送入管内，轻轻插在培养基上，再轻轻盖上瓶盖或塞上棉塞，最后将管口及棉塞在灯焰上灼烧数秒，灼烧时应旋转，避免烧坏。操作时注意瓶盖、棉塞不能乱放，要仔细理解并牢固树立无菌操作观念，严格执行无菌操作。

1.首先将消毒好的外植体材料放在无菌纸或灭过菌的培养皿或小瓷碟中进行切割，切块大小要适中。外植体的大小一般以0.5～1 cm为宜。具体来说，叶片、花瓣等为20～25 mm2的小方块，茎段长0.5～1 cm，茎尖分生组织长0.2～0.3 mm，并带1～2个叶原基。

注意：在切割过程中，剪刀和镊子每使用片刻就应擦干净放入95%酒精中，待灼烧放凉备用。通常两套工具交换使用，可提高工作效率，并防止连续污染（也称为交叉污染）的发生。如镊子夹了未消毒好的材料，再夹其他材料，就会造成交叉污染。又如剪刀或镊子碰到台面、管（瓶）的外壁、棉塞，以及手拿的部位过近，未能充分灼烧，连续使用过久等，都易引起交叉污染。经常灼烧操作工具可减少这种污染，即便污染，也是一个个独立发生的，不会连续成批地污染。

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图4-3-1　叶片外植体培养

2.用上述灼烧灭菌过的镊子将切割好的外植体材料植入培养基表面。具体操作是：左手几乎水平拿试管或培养瓶，靠近酒精灯焰，将管口外部在灯焰上灼烧数秒钟（管口不能灼烧灭菌，否则棉塞易烧坏），将灰尘、杂菌等固定在原处，此时在灯焰附近用右手慢慢打开瓶盖或棉塞，以免空气速向管内冲击，导致管口灰尘等冲入，造成污染。瓶盖或棉塞始终拿在手上，这时再将管口在灯焰上旋转，使其充分灼烧灭菌，主要注意管口附近，包括管口内表面，然后用右手拇、食、中指拿镊子夹一块外植体送入管内，轻轻插在培养基上，再轻轻盖上瓶盖或塞上棉塞，最后将管口及棉塞在灯焰上灼烧数秒，灼烧时应旋转，避免烧坏。镊子灼烧后放回架上，这样便完成了一瓶的接种操作，接着再接种第二瓶，如此一直到外植体全部接种完。(www.chuimin.cn)

操作时注意瓶盖、棉塞不能乱放，要仔细理解并牢固树立无菌操作观念，严格执行无菌操作。

问题2

外植体接种应遵循怎样的操作流程？

基本操作

植物组织培养技术：无菌操作步骤详解

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