现以MS培养基为例，说明培养液中各类物质母液制备的方法。在具体操作过程中，为了避免各种成分之间发生反应形成沉淀，一般将培养基成分中的KH2PO4、CaCl2·2H2O单独配制。表3-2-2 MS培养基微量元素母液（三）有机物质母液一般配制成200倍。表3-2-4 MS培养基铁盐母液（五）生长调节物质母液生长调节物质的用量极少，通常使用的质量浓度单位是mg/mL。......
2023-11-20
植物组织培养快繁技术：培养基配制基本操作
【摘要】：灭菌后取出培养瓶，让培养基自然冷却凝固。经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基最好在4℃～5℃低温下保存。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的1周内用完，其他培养基最多也不应超过1个月。图3-3-1培养基的灭菌问题2经过培养基制备的实际操作，我们能否总结出培养基的配制流程？
配方：MS+6-BA 2 mg+NAA 0.5 mg+蔗糖30 g+琼脂6 g，培养基制备量：10 L。
1.将已配好的各种母液按照大量元素（母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ）、微量元素、铁盐、有机物质、生长调节物质母液的顺序摆放好。
2.根据母液浓缩倍数和培养基制备量计算各种母液的取量，并计算琼脂和蔗糖的量。
已知：大量元素母液Ⅰ、母液Ⅱ、母液Ⅲ浓缩20倍。
微量元素母液浓缩200倍。
有机物质母液浓缩200倍。
铁盐母液浓缩200倍。
6-BA母液浓度为1 mg/mL。
NAA母液浓度为0.5 mg/mL。
所以，1 L（1000 mL）培养基需要量取：
大量元素母液Ⅰ：1000÷20=50（mL）
大量元素母液Ⅱ：1000÷20=50（mL）
大量元素母液Ⅲ：1000÷20=50（mL）
微量元素母液：1000÷200=5（mL）
铁盐母液：1000÷200=5（mL）
有机物质母液：1000÷200=5（mL）
6-BA母液：2 mg÷1 mg/mL=2（mL）
NAA母液：0.5 mg÷0.5 mg/mL=1（mL）
那么，配制10 L培养基需要量取：
大量元素母液Ⅰ：50 mL×10=500（mL）
大量元素母液Ⅱ：50 mL×10=500（mL）
大量元素母液Ⅲ：50 mL×10=500（mL）
微量元素母液：5 mL×10=50（mL）
铁盐母液：5 mL×10=50（mL）(www.chuimin.cn)
有机物质母液：5 mL×10=50（mL）
6-BA母液：2 mL×10=20（mL）
NAA母液：1 mL×10=10（mL）
琼脂：6 g×10=60（g）
蔗糖：30 g×10=300（g）
3.用量筒或移液管量取各种母液。
用天平称取琼脂用量：6 g×10=60（g）
用天平称取蔗糖用量：30 g×10=300（g）
4.一般在钢精锅中加入配制培养基总量2/3的蒸馏水，即约7 L蒸馏水。
5.加入琼脂，放在电炉或电磁炉上加热，并不断搅拌使之溶解。
6.将量取好的各种母液按照顺序倒入琼脂已溶化的钢精锅中，继续加温并不断搅拌，使之均匀溶解。
7.将称取好的蔗糖加入，搅拌溶解。
8.加蒸馏水定容至最终体积。
9.用pH试纸或酸度计测pH值，用0.1 N的HCl或0.1 N的NaOH调溶液pH值至5.6～5.8。
10.将已配好的培养液在琼脂没有凝固之前及时分装到培养容器中。分装时掌握好分装量，一般以占培养容器的1/4～1/3为宜。分装时注意不要把培养液黏附在瓶口上，以防引起污染。
11.用棉塞、封口膜或培养瓶盖封口。
12.培养液分装完毕后，应立即灭菌。通常应在高压蒸汽灭菌锅内，在汽相121℃条件下，灭菌20～25 min。灭菌后取出培养瓶，让培养基自然冷却凝固。最好放置1 d后再使用。
经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基最好在4℃～5℃低温下保存。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的1周内用完，其他培养基最多也不应超过1个月。在多数情况下，应在灭菌后2周内用完。
图3-3-1 培养基的灭菌
问题2
经过培养基制备的实际操作，我们能否总结出培养基的配制流程？
基本知识
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