灭菌后取出培养瓶，让培养基自然冷却凝固。经过灭菌的培养基应置于10℃下保存，特别是含有生长调节物质的培养基最好在4℃～5℃低温下保存。含吲哚乙酸或赤霉素的培养基，要在配制后的1周内用完，其他培养基最多也不应超过1个月。图3-3-1培养基的灭菌问题2经过培养基制备的实际操作，我们能否总结出培养基的配制流程？......
2023-11-20
植物组织培养快繁技术：MS培养基母液配制方法
【摘要】：现以MS培养基为例，说明培养液中各类物质母液制备的方法。在具体操作过程中，为了避免各种成分之间发生反应形成沉淀，一般将培养基成分中的KH2PO4、CaCl2·2H2O单独配制。表3-2-2 MS培养基微量元素母液（三）有机物质母液一般配制成200倍。表3-2-4 MS培养基铁盐母液（五）生长调节物质母液生长调节物质的用量极少，通常使用的质量浓度单位是mg/mL。
现以MS培养基为例，说明培养液中各类物质母液制备的方法。
MS完全培养基的母液有5种：大量元素母液（浓缩20倍）、微量元素母液（浓缩200倍）、铁盐母液（浓缩200倍）、除蔗糖之外的有机物质母液（浓缩200倍）、生长调节物质母液。
（一）大量元素母液配制
1.大量元素母液倍数的确定与计算
大量元素母液配制时要分别称量、分别溶解，按照表3-2-1的顺序混合、定容，以防出现沉淀。在具体操作过程中，为了避免各种成分之间发生反应形成沉淀，一般将培养基成分中的KH2PO4、CaCl2·2H2O单独配制。一般大量元素配成20倍的母液，使用时再稀释20倍。配制好后倒入磨口试剂瓶中，贴好标签、作好记录，常温保存或放在冰箱中保存。
表3-2-1 MS培养基大量元素母液（配1 L 20倍的母液）
问题2
知道了培养基的配方，又明确了大量元素母液的浓缩倍数，计算得到了1 L母液中所含的各种物质的质量。现在需要配制1 L母液，那么如何操作呢？
操作实例
2.大量元素母液配制步骤
以配制1 L大量元素母液Ⅰ为例。
图3-2-1 大量元素母液配制流程图
（二）微量元素母液配制
微量元素母液一般浓缩200倍。在配制微量元素母液时，也是分别称量、分别溶解，混合时可以不按顺序随意加入容量瓶中，再定容，一般不会出现沉淀。配制好后倒入磨口试剂瓶中，贴好标签、作好记录，常温保存或放在冰箱中保存。
表3-2-2 MS培养基微量元素母液（配1 L 200倍的母液）
（三）有机物质母液(www.chuimin.cn)
一般配制成200倍。按照表3-2-3的用量分别称取各种有机物，分别溶解后，倒入容量瓶，再用蒸馏水或超纯水定容于1 L，最后倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。也可将肌醇单独配制。
表3-2-3 MS培养基有机物质母液（配1 L 200倍的母液）
（四）铁盐母液
铁盐不易被植物吸收利用，只有螯合物才容易被植物吸收利用，所以铁盐必须单独配制，同时避免与其他无机元素混合而形成沉淀。目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二钠的螯合物，使用方便，不易产生沉淀。
配制方法：将5.56 g FeSO4·7H2O和7.46 g Na2-EDTA分别用450 mL蒸馏水溶解，适当加热并不断搅拌，溶解后，将硫酸亚铁溶液缓缓倒入乙二胺四乙酸二钠溶液中，最后定容到1000 mL，倒入棕色广口瓶中，贴上标签、作好记录，放在冰箱中备用。用时每配1000 mL培养基取5 mL。
表3-2-4 MS培养基铁盐母液（配1 L 200倍的母液）
（五）生长调节物质母液
生长调节物质的用量极少，通常使用的质量浓度单位是mg/mL。配制母液时，各种生长素和细胞分裂素要单独配制，不能混合在一起，母液一般配成0.5～1 mg/mL的质量浓度。
1.生长素
生长素一般要先用少量95%酒精或0.1 mol/L的NaOH溶解，然后用蒸馏水或超纯水定容，倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。
2.细胞分裂素
细胞分裂素一般要先用0.5～1 mol/L盐酸或0.1 mol/L的NaOH溶液溶解，然后加蒸馏水定容，倒入棕色广口瓶中，贴好标签、作好记录，放在冰箱中（4℃）备用。ZT先用少量95%酒精溶解，再用热蒸馏水定容。
3.赤霉素
赤霉素易溶于水，但溶于水后不稳定，易分解，最好用少量95%酒精配成母液贮存于冰箱备用，使用时再用蒸馏水稀释到所需的浓度。
琼脂、蔗糖等用量大的物质，不需要配制母液，使用时直接称量，随取随用。
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