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2023-11-09
维生素C的定量测定及稳定性实验-生物化学实验指导
【摘要】：因此，维生素C又称为抗坏血酸，有防治坏血病的功效。维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，易被氧化而破坏。维生素C标准溶液 准确称取20mg维生素C，溶于1%草酸溶液中，定容至100mL即成0.2mg/mL溶液。如果样品含维生素C太高或太低时，可酌量增减样液。
【目的要求】
1.学习并掌握定量测定维生素C的原理和方法。
2.了解蔬菜、水果中维生素C含量情况以及碱、热对维生素C含量的影响。
【实验原理】
维生素C是人类膳食中必需的维生素之一，如果缺乏维生素C，将导致坏血病发生。因此，维生素C又称为抗坏血酸，有防治坏血病的功效。抗坏血酸在自然界分布十分广泛，存在于新鲜水果和蔬菜中，尤其是植物及许多水果（柑橘类、草莓、山楂、辣椒等）中含量极为丰富。维生素C具有很强的还原性，在碱性溶液中加热并有氧化剂存在时，易被氧化而破坏。
在酸性环境中，抗坏血酸能将染料2，6-二氯酚靛酚还原成无色的还原型2，6-二氯酚靛酚，而抗坏血酸则被氧化成脱氢抗坏血酸。氧化型的2，6-二氯酚靛酚在中性或碱性溶液中呈蓝色，但在酸性溶液中呈粉红色。因此，当用2，6-二氯酚靛酚滴定含有维生素C的酸性溶液时，在维生素C未被全部氧化时，滴下的染料立即被还原成无色。一旦溶液中的维生素C全部被氧化时，滴下的染料便立即使溶液显示淡粉红色，此时即为滴定终点，表示溶液中的抗坏血酸刚刚全部被氧化，其反应过程如图3-15所示。依据滴定时2，6-二氯酚靛酚标准溶液的消耗量，可以计算出被测样品中维生素C的含量。
图3-15 2，6—二氯酚靛酚滴定维生素C反应
【试剂与器材】
1.试剂、材料
（1）橘子、苹果、鲜枣、辣椒等。
（2）2%草酸溶液。
（3）1mol/L NaOH溶液。
（4）1%草酸溶液。
（5）30%乙酸锌溶液。
（6）1mol/L HCl溶液。
（7）15%亚铁氰化钾溶液。
（8）2，6-二氯酚靛酚溶液 将50mg2，6-二氯酚靛酚溶于约200mL含有52mg NaHCO3的热水中。冷却后加水稀释至250mL。过滤后置棕色瓶内4℃贮存。使用时需用抗坏血酸标准溶液标定。
（9）维生素C标准溶液 准确称取20mg维生素C，溶于1%草酸溶液中，定容至100mL即成0.2mg/mL溶液。贮存于冰箱中，使用时用1%草酸溶液稀释至0.02mg/mL。
2.器材
电子天平；组织捣碎机；吸量管（5mL，10mL）；微量滴定管；容量瓶；漏斗；烧杯（100mL，500mL）；滤纸；电炉。
【操作方法】
1.样品提取
称取水果、蔬菜样品各100g，加入等体积2%草酸溶液，置组织捣碎机中捣成匀浆。称取10～20g浆状样品置于小烧杯中，用1%草酸溶液将样品移入100mL容量瓶中（若样品有颜色，加入5mL30%乙酸锌和5mL15%亚铁氰化钾脱色），并稀释至刻度，充分摇匀后过滤。
2.样品滴定
迅速吸取样品滤液5～10mL置于100mL三角瓶中，立即用2，6-二氯酚靛酚溶液滴定至淡红色，并保持15s不褪色，即达终点。同时，以10mL1%草酸溶液作为空白同上方法进行滴定。(www.chuimin.cn)
3.碱、热对维生素C含量的影响
（1）吸取水果或蔬菜滤液5mL置三角瓶中，加入1%草酸溶液5mL，加热煮沸3min。冷却后加入1%草酸5mL，滴定方法同前。
（2）吸取水果或蔬菜滤液5mL置三角瓶中，加入1mol/L NaOH溶液1mL，摇匀。放置3min后加入1mol/L HCl溶液1.5mL中和，然后加入1%草酸5mL，滴定方法同前。
4.计算
式中 V1——滴定样品时消耗染料的体积，mL；
V0——滴定空白时消耗染料的体积，mL；
T——1mL染料相当于维生素C标准溶液中维生素C的质量，mg；
m——滴定时所取滤液中含样品的质量，g。
【要点提示】
1.各样品滴定过程要迅速，一般不超过2min。以15s内不褪色为终点。
2.滴定所用的染料应在1～4mL之间。如果样品含维生素C太高或太低时，可酌量增减样液。
3.测定过程中应避免溶液接触金属离子。
【附注】
1.维生素C标准溶液的标定
吸取维生素C标准使用液（0.02mg/mL）5mL于三角瓶中，加入6%碘化钾溶液0.5mL，1%淀粉溶液3滴，再以0.001mol/L碘酸钾标准液滴定，终点为蓝色。
式中 V1——滴定时消耗0.001mol/L碘酸钾标准溶液的体积，mL；
V2——滴定时所取抗坏血酸的体积，mL；
0.088——1mL0.001mol/L碘酸钾标准溶液相当于抗坏血酸的量，mg。
2.2，6-二氯酚靛酚溶液的标定
吸取维生素C标准使用液（0.02mg/mL）5mL于三角瓶中，加入5mL1%草酸，用2，6-二氯酚靛酚染料滴定至微红色，并保持15s不褪色即为终点。由所用染料的体积计算出1mL染料相当于多少毫克的抗坏血酸。
【思考题】
1.样品经加热和加碱处理后，维生素C含量有什么变化，说明什么问题？
2.为什么滴定终点以淡红色存在15s为准？
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