（一）实验室安全在生物化学实验中，经常要与有腐蚀性，易燃、易爆和毒性很强的化学药品及有潜在危害性的生物材料直接接触，经常要用到煤气、水、电。酒精及其他可溶于水的液体着火时，应用石棉网或沙土扑灭。进行遗传重组的实验室应根据有关规定加强生物安全的防范措施。（二）实验室应急处理在生物化学实验中，如不慎发生受伤事故，应立即采取适当的急救措施。汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时，应用石棉网或沙土灭火。......
2025-09-30
蛋白质性质实验-生物化学实验指导
【摘要】：可用于蛋白质的定性或定量测定。因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。
一、蛋白质及氨基酸的呈色反应
【目的要求】
1.了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。
2.了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反应原理。
3.学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
（一）双缩脲反应
【实验原理】
尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反应称为双缩脲反应（图3-2）。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。可用于蛋白质的定性或定量测定。
因此，一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应，但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。
【试剂与器材】
1.试剂
尿素；10%氢氧化钠溶液；1%硫酸铜溶液；2%卵清蛋白溶液。
图3-2 双缩脲反应小紫红色铜双缩脲复合物分子
2.器材
酒精灯；试管夹；试管1.5cm×15cm。
【操作方法】
1.取黄豆粒大小的尿素，放入干燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷却后，加1mL10%氢氧化钠溶液，振荡混匀，再加1滴1%硫酸铜溶液，再振荡。观察出现的粉红颜色（避免添加过量硫酸铜，否则，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色）。
2.另取一试管加1mL卵清蛋白溶液和2mL10%氢氧化钠溶液，摇匀，再加2滴1%硫酸铜溶液，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
（二）茚三酮反应
【实验原理】
除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反应产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。该反应分两步进行（图3-3），首先是氨基酸被氧化，产生CO2、NH3和醛，而水和茚三酮被还原为还原型茚三酮，然后是还原型茚三酮与另一分子水和茚三酮与NH3缩合生成有色物质。
β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈阳性反应。尿素、马尿酸和肽键上的亚氨基不呈现此反应。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应，但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
【试剂与器材】
1.试剂
（1）2%卵清蛋白或新鲜鸡蛋清溶液（蛋清∶水=1∶9）；
（2）0.5%甘氨酸溶液；
（3）0.1%茚三酮水溶液；
（4）0.1%茚三酮-乙醇溶液；
（5）蛋白质溶液。
2.器材
恒温水浴锅；试管及试管夹；烧杯；酒精灯；电磁炉；不锈钢锅；滤纸。
【操作方法】
1.取2支试管分别加入蛋白质溶液和甘氨酸溶液1mL，再各加0.5mL0.1%茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2min，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
图3-3 蛋白质、氨基酸的茚三酮反应
2.在一小块滤纸上滴1滴0.5%甘氨酸溶液，风干后，再在原处滴1滴0.1%茚三酮-乙醇溶液，在微火旁烘干显色，观察紫红色斑点的出现。
（三）黄色反应
【实验原理】
含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成橙黄色的硝醌酸钠。
多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应，苯丙氨酸不易硝化，需加入少量浓硫酸才有黄色反应。
【试剂与器材】
1.试剂
10%氢氧化钠溶液；鸡蛋清溶液；浓硝酸；指甲或头发。
2.器材
恒温水浴锅；试管；试管夹；烧杯；酒精灯。
【操作方法】
1.取一支试管，加鸡蛋清溶液1滴及浓硝酸2滴，由于强酸作用，出现蛋白质沉淀。用微火加热，沉淀变为黄色。冷却后，逐滴加入10%氢氧化钠溶液至碱性，观察颜色变化。
2.剪一些指甲或头发放入试管，加入数滴浓硝酸，观察颜色变化。
（四）乙醛酸反应
【实验原理】
含有吲哚基的色氨酸在浓硫酸存在下与乙醛酸（CHOCOOH）缩合，形成与靛蓝相似的物质。此反应机理尚不清楚，可能是由一分子乙醛酸与两分子色氨酸脱水缩合而成的。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。
【试剂与器材】
1.试剂
蛋白质溶液；冰醋酸；浓硫酸（分析纯）；2%白明胶。
2.器材
恒温水浴锅、试管及试管夹。(https://www.chuimin.cn)
【操作方法】
取2支试管，分别加入蛋白质溶液和5滴2%白明胶，再加浓冰醋酸1～2mL，混匀，倾斜试管慢慢地沿管壁各加1mL浓硫酸，使之两相重叠，静置5min后则两相界面处出现紫红色环，若效果不明显可水浴加热。
（五）醋酸铅反应和亚硝基铁氰化钠反应
【实验原理】
多数蛋白质分子中常有含硫的氨基酸，如半胱氨酸和胱氨酸，含硫蛋白质在强碱作用下可分解产生硫化钠。硫化钠与醋酸铅反应生成黑色的硫化铅沉淀，若加入浓盐酸则有硫化氢气体产生。
蛋白质中的半胱氨酸和胱氨酸极易脱硫，而含硫的氨基酸甲硫氨酸对强碱相当稳定，不产生此反应。在碱性条件下含有—SH的半胱氨酸与亚硝基铁氰化钠反应形成玫瑰色物质。
【试剂与器材】
1.试剂
（1）未稀释的鸡蛋清。
（2）10%的NaOH溶液。
（3）1.5%Pb（Ac）2溶液（醋酸铅溶液）。
（4）5%亚硝基铁氰化钠。
（5）浓盐酸。
（6）0.3%苯丙氨酸、0.3%酪氨酸、0.3%半胱氨酸。
2.器材
恒温水浴锅；试管及试管夹；酒精灯。
【操作方法】
1.向试管中先加入1.5%Pb（Ac）2溶液约1mL，再慢慢滴加10%的NaOH溶液，边加边振摇，直到产生的沉淀溶解为止。此时再向试管内加未稀释的鸡蛋清5～6滴，混匀。置酒精灯上加热1min，溶液变黑，小心加入2mL浓盐酸，黑色褪去，嗅其味。
2.在白瓷板上，各加0.3%苯丙氨酸、0.3%酪氨酸、0.3%半胱氨酸溶液各2滴，分别加3滴10%NaOH溶液和2～3滴5%亚硝基铁氰化钠溶液，观察显色反应（颜色不稳定，会很快消失）。
二、蛋白质的沉淀反应
【目的要求】
1.熟悉蛋白质的沉淀反应。
2.进一步掌握蛋白质的有关性质。
【实验原理】
多数蛋白质是亲水胶体，当其稳定因素被破坏或与某些试剂结合成不溶解的盐后，即产生沉淀。
【试剂与器材】
1.试剂
（1）蛋白质试液。
（2）1%醋酸铅 1g醋酸铅溶于蒸馏水并稀释至100mL。
（3）5%鞣酸溶液 5g鞣酸溶于水并稀释至100mL。
（4）1%硫酸铜溶液 1g硫酸铜溶于水并稀释至100mL。
（5）1%硝酸银。
（6）10%三氯乙酸。
（7）5%磺基水杨酸。
2.器材
（1）试管1.5cm×15cm（×7）。
（2）吸管5.0mL（×2）、2.0mL（×2）、1.0mL（×1）。
（一）乙醇沉淀蛋白质
乙醇为脱水剂，能破坏蛋白质胶体的水化层而使其沉淀析出。
【操作方法】
取蛋白质溶液1mL，加晶体NaCl少许（加速沉淀并使沉淀完全），待溶解后再加入95%乙醇2mL混匀。观察有无沉淀析出。
（二）重金属盐析沉淀蛋白质
蛋白质与重金属离子（如Cu2+、Ag+、Hg2+等）结合成不溶性盐类而沉淀。
【操作方法】
取试管3支，分别加入蛋白质溶液1mL，再分别加入1%AgNO3、1%醋酸铅、1%CuSO4溶液各1～3滴，振荡试管，观察沉淀生成。放置片刻，倾去上清，加少量水，观察沉淀是否溶解，解释原因。
（三）有机酸沉淀蛋白质
【操作方法】
取试管2支，分别加入蛋白质溶液1mL，再分别加入10%三氯乙酸和5%磺基水杨酸溶液各1～3滴，振荡试管，观察沉淀生成。放置片刻，倾去上清，加少量水，观察沉淀是否溶解，解释原因。
【要点提示】
1.当加热试管时，试管口不准对着别人。
2.闻带有刺激性气味的气体时，用手扇着闻少许即可，不要直接凑到管口去闻。
【思考题】
1.蛋白质有哪些显色反应？
2.列表写出蛋白质的颜色反应和沉淀反应。
相关文章
- 详细阅读
-
免疫化学技术简介及应用-生物化学实验指导详细阅读
（一）免疫化学技术简介现代免疫化学是研究抗原与抗体的组成、结构以及抗原和抗体反应的机制的学科。目前，免疫化学已经应用于免疫性疾病发病机制的基础研究和临床检测等。随着免疫化学、细胞生物学及分子生物学的进展，免疫学实验技术也迅猛发展，并已成为当今生命科学研究的重要手段，尤其是在医学基础研究和临床实践中得到广泛应用。免疫学检测方法可分为体液免疫测定及细胞免疫测定。......
2025-09-30
-
生物化学实验指导：电泳技术的原理、应用及发展详细阅读
电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。在很长一段时间里，小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析，但目前一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展，使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。......
2025-09-30
- 详细阅读
-
八蛋白质与氨基酸的呈色反应生物化学实验详细阅读
实验类型 验证性教学时数 3操作视频一、实验目的学习鉴定蛋白质与氨基酸的方法及原理。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反应。此法可用于蛋白质的定性或定量测定。多数蛋白质分子都含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反应。......
2025-09-30
-
生物化学实验指导：紫外和可见光谱技术应用广泛详细阅读
（一）紫外和可见光谱法紫外和可见光谱法是一种只在可见光及紫外光光谱应用范围内测量物质吸收辐射线的技术，应用十分广泛。分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。吸收光谱中，λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质，其特征随物质的结构而异，所以是物质定性的依据。分光光谱技术可用于如下几个方面：通过测定某种物质吸收或发射光谱来确定该物质的组成。......
2025-09-30
-
生物化学实验：记录与报告详细阅读
每次做实验前认真预习，实验操作中仔细观察，并如实记录实验现象与数据，课后及时完成实验报告。实验原理要简明扼要；操作方法和步骤要用流程图或表格形式表达；预习中遇到的问题要记录并提出。（二）记录详细、准确地做好实验记录是极为重要的，也是培养学生实验能力和严谨的科学作风的重要方面。实验报告必须独立完成，严禁抄袭。......
2025-09-30
-
生物化学实验规则手册详细阅读
完成实验后经教师检查同意，方可离开实验室。实验完毕，需将药品试剂排列整齐，仪器要洗净后置于实验柜中并排列整齐，将实验台面清理干净才能离开实验室。实验室内严禁吸烟。实验室内一切物品未经本室负责教师批准，严禁携带出室外。出借物品必须办理登记手续。离开实验室前应认真、负责地进行检查，严防发生安全事故。值日生的职责是负责当天实验室的卫生、安全和一切服务性的工作。......
2025-09-30
相关推荐