可溶性糖的比色法测定实验成果

2023-11-06 理论教育版权反馈

【摘要】：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在490nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

【目的要求】

1.掌握可溶性糖的测定原理。

2.学习用比色法测定可溶性糖的方法。

【实验原理】

植物体内的可溶性糖主要是指能溶于水和乙醇的单糖和寡聚糖。糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10～100mg范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在490nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。

硫酸-苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色能稳定160min以上。

【试剂与器材】

1.试剂

（1）90%苯酚溶液称取90g苯酚（AR），加蒸馏水10mL溶解，在室温下可保存数月。

（2）9%苯酚溶液取3mL90%苯酚溶液，加蒸馏水至30mL，现配现用。

（3）浓硫酸（相对密度1.84）。

（4）0.1g/L蔗糖标准液将分析纯蔗糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g，加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。

（5）100μg/L蔗糖标准液精确吸取1mL0.1g/L蔗糖标准液加入100mL容量瓶中，加水定容。

（6）待测糖样品新鲜菠菜叶片。

2.器材

分光光度计；恒温水浴锅；20mL刻度试管；刻度吸管；记号笔；吸水纸。

【操作方法】

1.标准曲线的制作

取20mL刻度试管8支，从0～7分别编号，按表3-4加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1mL9%苯酚溶液，摇匀，再小心加入5mL浓硫酸，摇匀。比色液总体积为8mL，在恒温下放置30min，显色。然后以空白为参比，在485nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。(www.chuimin.cn)

表3-4 蔗糖标准曲线

2.可溶性糖的提取

取新鲜菠菜叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，称取3份，每份0.10～0.30g，分别放入3支刻度试管中，加入5～10mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水浴中提取30min（提取2次），提取液过滤入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

3.测定可溶性糖

吸取0.5mL样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5mL，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。

可溶性糖含量（%）=c×V×n/（α×m×106）×100

式中 c——标准方程求得糖量，μg；

α——吸取样品液体积，mL；

V——提取液量，mL；

n——稀释倍数；

m——样品质量，g。

【要点提示】