蒽酮-硫酸比色法测定糖含量实验结果

2023-11-06 理论教育版权反馈

【摘要】：该物质在625nm处有最大吸收，在0～150μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定。在625nm波长下迅速测定各管吸光值。

【目的要求】

1.掌握总糖的测定原理。

2.学习用蒽酮比色法测定总糖的方法。

【实验原理】

糖类在较高温度下可被浓硫酸作用而脱水生成糠醛或羟甲基糠醛后，与蒽酮脱水缩合，形成的糠醛衍生物呈蓝绿色。该物质在625nm处有最大吸收，在0～150μg/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该法有很高的灵敏度，糖含量在30μg左右就能进行测定。

【试剂与器材】

1.试剂

（1）蒽酮试剂精密称取0.1g蒽酮，加100mL80%浓H₂SO₄使溶解，摇匀。当日配制使用。

（2）1mg/mL葡萄糖标准溶液准确称取80℃烘至恒重的分析纯无水葡萄糖1g，置于烧杯中，加少量水溶解后再加5mL浓盐酸，以蒸馏水定容至1000mL。混匀，4℃冰箱中保存备用。

（3）待测糖样品新鲜菠菜叶片。

2.器材

分析天平；分光光度计；容量瓶（100mL、50mL、10mL）；烧杯；具塞试管；移液器及吸头；涡旋振荡器；废液缸。

【操作方法】

1.葡萄糖标准曲线的制作

取7支具塞试管，按表3-3数据配制不同浓度的葡萄糖标准溶液，每个浓度做2～3个重复。

表3-3 葡萄糖标准曲线

各管加完溶液后一起置于沸水浴中加热15min取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min。在625nm波长下以第1管为空白，迅速测定其余各管吸光值。以标准葡萄糖含量（μg）为横坐标，以吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

2.可溶性糖的提取(www.chuimin.cn)

取新鲜菠菜叶片，擦净表面污物，剪碎混匀，每份称取0.10～0.30g，共3份，分别放入3支刻度试管中，加入5～10mL蒸馏水，用塑料薄膜封口，于沸水浴中提取30min（提取2次），提取液过滤后倒入25mL容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。

3.样品的测定

将样品溶液糖浓度调整到测定范围，精确吸取2mL置于干燥洁净试管中，在每支试管中立即加入蒽酮试剂6mL，振荡混匀，各管加完后一起置于沸水浴中加热15min。取出，迅速浸于冰水浴中冷却15min，每个浓度做2～3个重复。在625nm波长下迅速测定各管吸光值。根据葡萄糖含量的标准曲线，由样品溶液吸光值计算各样品溶液中糖的浓度，并计算其糖含量。

式中 m₀──由标准曲线上查得的葡萄糖的质量，mg；

V──样品稀释液总体积，mL；

m──样品质量，g；

0.5──吸取样品的量，mL；

1000──g换算成mg的系数；

0.9──还原糖换算成淀粉的换算系数。

【要点提示】

1.蒽酮法测出的碳水化合物含量，是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。

2.在测定水溶性碳水化合物时，切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，否则会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应，而增加测定误差。

3.不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时则可避免此种误差。

【思考题】

1.用水提取的糖类有哪些？