可用于蛋白质的定性或定量测定。因此,一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反应,但有双缩脲反应的物质不一定都是蛋白质或多肽。因此,虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反应,但能与茚三酮呈阳性反应的不一定就是蛋白质或氨基酸。含有色氨酸的蛋白质也有此反应。......
2023-11-06
生物科学是20世纪自然科学中发展最迅速的学科,其中生物化学与分子生物学的发展尤为突出,出现了许多新思想、新成果和新技术,主要依赖于生物化学与分子生物学实验技术的不断发展和完善。在生化实验技术发展史上,出现了一些非常重要的实验技术。
1924年,瑞典著名的化学家T.Svedberg发明了“超离心技术”,制成了第一台5000g(5000~8000r/min)相对离心力的超离心机,开创了生化物质离心分离的先河,并准确测定了血红蛋白等复杂蛋白质的相对分子质量,获得了1926年诺贝尔化学奖。
1937年,瑞典生化学家Tiselius发明了Tiselius电泳仪,在此基础上建立了研究蛋白质的自由界面电泳方法,利用该法首次证明人血清是由白蛋白(A)、α-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白组成,并因此获得1948年诺贝尔化学奖。在此基础上,电泳技术不断发展,1969年,Weber应用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳技术测定了蛋白质的相对分子质量。
1938年,英国科学家Martin和Synge发明了分配色谱,利用氨基酸在水和有机溶剂中的溶解度差异分离不同种类的氨基酸,层析技术成为分离生化物质的关键技术,他们因此获得1952年的诺贝尔化学奖。(www.chuimin.cn)
1985年,美国PE-Cetus公司人类遗传研究室的Mullis等发明了具有划时代意义的聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)的DNA扩增技术,对于生物化学和分子生物学具有划时代的意义,他获得了1993年的诺贝尔生理学奖。
生物化学的发展离不开生化实验技术的发展,实验技术每一次的新发明都极大地推动了生物化学研究的进展,因此学习和掌握各种生物化学实验原理和技术是极为重要的。
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2023-11-06
葡萄糖分子中含有醛基,能被次碘酸钠氧化,过量的次碘酸钠酸化后析出碘,再用硫代硫酸钠标准溶液滴定过剩的碘,计算出酶活力。糖化酶活力测定中应注意哪些因素?......
2023-11-06
(一)实验室安全在生物化学实验中,经常要与有腐蚀性,易燃、易爆和毒性很强的化学药品及有潜在危害性的生物材料直接接触,经常要用到煤气、水、电。酒精及其他可溶于水的液体着火时,应用石棉网或沙土扑灭。进行遗传重组的实验室应根据有关规定加强生物安全的防范措施。(二)实验室应急处理在生物化学实验中,如不慎发生受伤事故,应立即采取适当的急救措施。汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时,应用石棉网或沙土灭火。......
2023-11-06
电泳技术,是指在电场作用下,带电颗粒由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。在很长一段时间里,小分子物质如氨基酸、多肽、糖等通常用滤纸或纤维素、硅胶薄层平板为介质的电泳进行分离、分析,但目前一般使用更灵敏的技术如HPLC等来进行分析。凝胶作为支持介质的引入大大促进了电泳技术的发展,使电泳技术成为分析蛋白质、核酸等生物大分子的重要手段之一。......
2023-11-06
核酸及其衍生物核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在260nm波长处。因此,测定未知浓度核酸溶液的A260值,即可计算出其中RNA或DNA的含量。通常蛋白质的最大吸收峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低,因此对于含有微量蛋白质的核酸样品,测定误差较小。选择厚度为1cm的石英比色杯,于紫外分光光度计上260nm波长处测定A值。......
2023-11-06
(一)紫外和可见光谱法紫外和可见光谱法是一种只在可见光及紫外光光谱应用范围内测量物质吸收辐射线的技术,应用十分广泛。分光光度法是利用物质所特有的吸收光谱来鉴别物质或测定其含量的一项技术。吸收光谱中,λmax、λmin、肩峰以及整个吸收光谱的形状决定于物质的性质,其特征随物质的结构而异,所以是物质定性的依据。分光光谱技术可用于如下几个方面:通过测定某种物质吸收或发射光谱来确定该物质的组成。......
2023-11-06
脂肪酸的β-氧化是脂类分解代谢的重要途径,在动物肝脏中进行。脂肪酸经β-氧化作用生成乙酰辅酶A。乙酰乙酸β-羟丁酸和丙酮统称为酮体。表3-28 酮体的生成3.酮体的测定另取50mL锥形瓶2只并编号,按表3-29操作进行酮体的测定。......
2023-11-06
(一)免疫化学技术简介现代免疫化学是研究抗原与抗体的组成、结构以及抗原和抗体反应的机制的学科。目前,免疫化学已经应用于免疫性疾病发病机制的基础研究和临床检测等。随着免疫化学、细胞生物学及分子生物学的进展,免疫学实验技术也迅猛发展,并已成为当今生命科学研究的重要手段,尤其是在医学基础研究和临床实践中得到广泛应用。免疫学检测方法可分为体液免疫测定及细胞免疫测定。......
2023-11-06
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