核酸及其衍生物核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在260nm波长处。因此,测定未知浓度核酸溶液的A260值,即可计算出其中RNA或DNA的含量。通常蛋白质的最大吸收峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低,因此对于含有微量蛋白质的核酸样品,测定误差较小。选择厚度为1cm的石英比色杯,于紫外分光光度计上260nm波长处测定A值。......
2023-11-06
课题设计
细胞内的核酸包括DNA与RNA两种分子,均与蛋白质结合成核蛋白。DNA与蛋白质结合成脱氧核糖核蛋白(DNP),RNA与蛋白质结合成核糖核蛋白(RNP)。其中真核生物的DNA又有染色体DNA与细胞器DNA之分。前者位于细胞核内,约占95%,为双链线性分子;后者存在于线粒体或叶绿体等细胞器内,约占5%,为双链环状分子。除此之外,在原核生物中还有双链环状的质粒DNA;在非细胞型的病毒颗粒内,DNA的存在形式多种多样,有双链环状、单链环状、双链线状和单链线状之分。DNA分子的总长度在不同生物间差异很大,一般随生物的进化程度而增长。如人的DNA大约由3.0 ×109个碱基对(base pair,bp)组成,与5243bp的猿猴病毒(simian virus 40,SV40)相比,其长度约为后者的5.7 ×105倍。相对来讲,RNA分子比DNA分子要小得多。由于RNA的功能是多样性的,RNA的种类、大小和结构都较DNA多样化。DNA与RNA性质上的差异决定了两者的最适分离与纯化的条件是不一样的。(www.chuimin.cn)
临床常见的标本有血液、尿液、唾液、组织及培养细胞等;核酸分离与纯化的方法非常多,如何恰当地收集与准备材料,选择适宜的分离与纯化方法是一个首要的问题。首先我们应当明确核酸的分离与纯化并不是最终的目的,不同的实验研究与应用对核酸的产量、完整性、纯度和浓度可能有不同的要求;至于分离与纯化核酸所需的时间与成本也往往需要考虑;在不影响核酸质量的情况下,应选择安全无毒的试剂与方案。近年来,有关试剂盒的开发与自动化仪器的使用,能批量制备核酸样品,大大提高了分离与纯化的效率。
有关生物化学实验的文章
核酸及其衍生物核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶具有吸收紫外光的性质,其吸收高峰在260nm波长处。因此,测定未知浓度核酸溶液的A260值,即可计算出其中RNA或DNA的含量。通常蛋白质的最大吸收峰在280nm波长处,在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低,因此对于含有微量蛋白质的核酸样品,测定误差较小。选择厚度为1cm的石英比色杯,于紫外分光光度计上260nm波长处测定A值。......
2023-11-06
掌握凝胶柱层析分离技术的原理。利用交联葡聚糖凝胶G 50的凝胶过滤作用,将脲酶和胰岛素分开,以FolimDenis反应检查流出液中的蛋白质。将乳胶管放下,仍继续加入上述悬液至凝胶层沉积至18cm高度即可。操作过程中,应防止气泡与分层现象的发生。某样品中含有1mg A蛋白、1mg B蛋白、4mg C蛋白、1mg D蛋白、1mg E蛋白,采用Sephadex G75凝胶柱层析,请指出各蛋白质的洗脱顺序。通过实验讨论,哪些因素会影响凝胶层析的分离效果?......
2023-11-09
实验类型 综合性教学时数 6一、实验目的通过大蒜细胞SOD的提取与分离,学习和掌握作方法。蛋白质和酶的提取与分离的基本原理和操作。大蒜蒜瓣和悬浮培养的大蒜细胞中含有较丰富的SOD,通过组织或细胞破碎后,可用pH7.8磷酸缓冲液提取出。并利用各种呈色反应来测定SOD的活力。......
2023-11-04
纸上层析法是生物化学中分离、鉴定氨基酸混合物的经典技术,可用于蛋白质、氨基酸组成定性鉴定和定量测定,也是定性或定量测定多肽、核酸碱基、糖、有机酸、维生素、抗生素等物质的一种分离分析工具。图3-5 卷成筒状的层析滤纸图3-6 层析图谱1—原点 2—斑点中心 3—溶剂前沿6.Rf值计算:用尺子分别测量原点至各显色斑点中心的距离以及原点至溶剂前沿的距离,计算其比值,即可得各标准氨基酸及混合液中各氨基酸的Rf值。......
2023-11-06
(一)离心技术离心技术就是利用旋转运动的离心力,以及物质的沉降系数或浮力密度的差别进行分离、浓缩和提纯的一项操作技术。近年来,在生物化学、分子生物学及生物工程等书刊文献中,对于某些大分子化合物,当它们的详细结构和相对分子质量不很清楚时,常常用沉降系数这个概念去描述它们的大小。主要适宜于细菌等微生物、细胞和细胞器等生物材料,及病毒和染色体DNA等的离心分离。......
2023-11-04
实验类型 验证性教学时数 3操作视频一、实验目的掌握酵母RNA提取的方法。RNA可溶于碱性溶液,用氢氧化钠使酵母细胞壁变性、裂解,然后用酸中和,离心除去蛋白质和菌体后,上清液用乙醇沉淀,由此可得RNA的粗制品。RNA由核糖、碱基和磷酸组成,加入硫酸煮沸后可使其水解,从水解液中可对上述组分进行分别鉴定。向上述含有RNA的离心管内加10% H2SO45mL,加热煮沸1~2min,将RNA水解。......
2023-11-04
实验类型 验证性教学时数 3一、实验目的掌握定磷法测定核酸含量的原理与方法。钼蓝在660nm处有最大光吸收峰,在一定浓度范围内,蓝色的深浅和磷含量呈正比,可用比色法测定。......
2023-11-04
相关推荐