β-氧化对34种脂肪酸的实验结果展示

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型综合性教学时数 3一、实验目的了解脂肪酸的β—氧化作用。掌握测定β—氧化作用的原理和方法。肝脏不能利用酮体，必须经血液运至肝外组织特别是肌肉和肾脏，再转变为乙酰CoA而被氧化利用。为什么可以通过测丙酮的量来推算出细胞脂肪酸β—氧化作用的强弱？

实验类型综合性

教学时数 3

一、实验目的

（1）了解脂肪酸的β—氧化作用。

（2）掌握测定β—氧化作用的原理和方法。

二、实验原理

在肝脏中，脂肪酸经β—氧化的作用生成乙酰辅酶A（乙酰CoA），两分子的乙酰CoA可缩合生成乙酰乙酸。乙酰乙酸可进一步脱羧生成丙酮，也可还原生成β—羟丁酸。乙酰乙酸，β—羟丁酸和丙酮总称为酮体。肝脏不能利用酮体，必须经血液运至肝外组织特别是肌肉和肾脏，再转变为乙酰CoA而被氧化利用。酮体作为有机体代谢的中间产物，在正常的情况下，其产量甚微，患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也会出现酮体。

本实验以丁酸为底物，用新鲜肝糜与之保温，反应过程如下：

丙酮可利用碘仿反应测定，反应式如下：

2NaOH+I₂—→NaOI+NaI+H₂O

CH₃COCH₃+3NaOI—→CHI₃（碘仿）+CH₃COONa+2NaOH

剩余的碘可用标准Na₂S₂O₃滴定：

NaOI+NaI+2HCl—→I₂+2NaCl+H₂O

I₂+2Na₂S₂O₃—→Na₂S₄O₆+2NaI

根据滴定样品与滴定对照所消耗的Na₂S₂O₃溶液的体积之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

三、实验仪器与试剂

1.材料

新鲜动物肝脏。

2.仪器

匀浆器或研钵、恒温水浴锅、试管和试管架、剪刀、镊子锥形瓶50mL、移液管（5mL，10mL）。

3.试剂(www.chuimin.cn)

0.5%淀粉溶液、0.9%氯化钠溶液、1/15mol/L pH7.6磷酸缓冲液、0.5mol/L丁酸溶液、15%三氯乙酸溶液、10%盐酸溶液、0.1mol/L碘溶液、标准0.05mol/L Na₂S₂O₃溶液。

四、实验内容

1.肝糜的制备

将家兔或大白鼠放血处死，取出肝脏。用0.9%NaCl溶液洗去表面的污血后，用滤纸吸去表面的水分，称取肝组织5g，置于研钵中加入少许0.9%NaCl溶液，将肝组织研磨成肝匀浆。再加入0.9%NaCl溶液至总体积达10mL，低温保存备用（临用前制备）。

2.酮体的生成

（1）取50mL锥形瓶2只，按下表编号后，分别加入各试剂：

（2）将加入试剂的1、2锥形瓶摇匀，至于43℃恒温水浴锅中保温40min后取出。

（3）于上述锥形瓶中分别加入3mL 15%三氯乙酸溶液，在对照瓶中追加2mL正丁酸，摇匀，室温放置15min后过滤，收集滤液。

3.酮体的测定

（1）另取2只50mL锥形瓶，按下表编号后加入有关试剂。加完试剂后摇匀，放置10min。

（2）于各锥形瓶中滴加3mL 10%HCl溶液，用标准0.05mol/L Na₂S₂O₃溶液滴定剩余的碘。滴定至浅黄色时，加入3滴0.5%淀粉液作指示剂。摇匀并继续滴到蓝色消失。记录滴定样品和对照所用的Na₂S₂O₃溶液的体积，并计算样品中的丙酮含量。

五、实验结果与计算

实验中肝糜催化生成的丙酮量（mmol/g）=（B-A）×C×1/6

式中 A——滴定实验管所消耗的0.01mol/L Na₂S₂O₃溶液的体积，mL；

B——滴定对照管所消耗的0.01mol/L Na₂S₂O₃溶液的体积，mL；

C——标准Na₂S₂O₃溶液的浓度，mol/L。

六、思考题

（1）什么是酮体？本实验如何计算样品中丙酮的含量？

（2）为什么可以通过测丙酮的量来推算出细胞脂肪酸β—氧化作用的强弱？

（3）本实验为什么选用肝组织？选用其他组织是否可以？为什么？

β-氧化对34种脂肪酸的实验结果展示

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