生物化学实验之蛋白质定量测定：考马斯亮蓝染色法

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型综合性教学时数 6操作视频一、实验目的掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质的原理与方法。计算样品中蛋白质含量。

实验类型综合性

教学时数 6

操作视频

一、实验目的

（1）掌握考马斯亮蓝染色法定量测定蛋白质的原理与方法。

（2）熟练分光光度计的使用和操作方法。

二、实验原理

考马斯亮蓝G250在酸性溶液中呈红棕色，最大吸收峰在465nm，它与蛋白质通过范德华力结合成复合物时变为蓝色，其最大吸收峰为595nm，蛋白质—染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。

三、实验仪器与试剂

1.材料

稀释40倍的纯牛奶。

2.器材(www.chuimin.cn)

721分光光度计、试管、试管架、移液管。

3.试剂

考马斯亮蓝G250、0.9%生理盐水、蛋白质标准溶液（1mg/mL）。

四、实验内容

（1）标准曲线的制作：取试管6支，按下表编号并加入试剂充分混匀。

分别向每支试管中加入考马斯亮蓝G250试剂 3.0mL，充分振荡，放置5min，于595nm测定吸光度，以1号试管为空白对照，以A_595nm为纵坐标，标准蛋白质含量为横坐标，绘制标准曲线。

（2）样品测定：取试管三支，吸取上述样品提取液0.1mL，加入考马斯亮蓝G2503.0mL，充分振荡混合，放置5min，以1号试管为空白对照，于595nm测定吸光度，在标准曲线上查出其相当于标准蛋白的量。

（3）计算样品中蛋白质含量。

五、思考题

比较其他蛋白质含量测定方法，指出本法的优缺点。