醋酸纤维素薄膜是纤维素的羟基乙酰化为乙酸酯溶于丙酮制成的。......
2023-11-06
生物化学实验：醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白
【摘要】：实验类型 综合性教学时数 6操作视频一、实验目的学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一些原理。醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维制成，它具有均一的泡沫状结构，厚度仅120μm，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用量少，分离清晰，无吸附作用，快速简便等优点。用醋酸纤维薄膜做电泳支持物有什么优点？
实验类型 综合性
教学时数 6
操作视频
一、实验目的
学习醋酸纤维薄膜电泳的操作，了解电泳技术的一些原理。
二、实验原理
血清中含有数种蛋白质，它们的等电点大都在p H6以下，因此在p H6的缓冲液都以阴离子状态存在，通电后都向阳极移动，由于它们所带的电荷数目和分子质量不同，在电泳场中泳动的速度不同，故可利用电泳法将它们分离。
醋酸纤维薄膜由二乙酸纤维制成，它具有均一的泡沫状结构，厚度仅120μm，渗透性强，对分子移动无阻力，用它作区带电泳的支持物，具有用量少，分离清晰，无吸附作用，快速简便等优点。目前已广泛用于血清蛋白、脂蛋白、血红蛋白、糖蛋白及酶的分离和免疫电泳等方面。
三、实验仪器与试剂
1.材料
新鲜血清（无溶血现象）。
2.仪器
醋酸纤维薄膜（2 ×8cm）、常压电泳仪、毛细管、培养皿、玻璃板、竹镊、粗滤纸。
3.试剂
巴比妥缓冲液（pH8.6，离子强度0.07mol/L）、氨基黑染色液、漂洗液、透明液。
四、实验内容(www.chuimin.cn)
1.浸泡
用镊子取醋酸纤维薄膜一条（识别出光泽面与无光泽面，并在角上用笔做上记号），放在缓冲液中浸泡20min。
2.点样
把膜条从缓冲液中取出，夹在两层粗滤纸内吸干多余的液体，然后平铺在玻璃板上（无光泽面朝上）。用毛细管取血清2～3μL，均匀涂在点样器上，然后将点样器在膜条一端1.5cm处轻轻地水平接触并随即提起，这样血清样品即呈条状溶于纤维薄膜上。
3.电泳
在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高，将膜条平贴于泳槽支架的滤纸桥上，点样端靠近负极，盖严电泳室，通电进行电泳，调电压至160V，电流强度0.4～0.7mA/cm，电泳时间约为1h。
4.染色
电泳完毕后将膜条取下并放在染色液中浸泡10min。
5.漂洗
将膜条从染色液中取出后移置到漂洗液中漂洗数次（约3～4次）至无蛋白区底色脱净为止，再浸入蒸馏水中。
6.透明和支持
将上述漂净的薄膜用滤纸吸干，待完全干燥后，浸入透明液中约2～3min后取出平贴于洁净玻璃板上，干燥后即得背景透明的电泳图谱，可用光密度计直接测定各蛋白斑点，此图谱可长期保存。
五、思考题
（1）电泳结果可见几条蛋白条带？分别标出其类别名称。
（2）用醋酸纤维薄膜做电泳支持物有什么优点？
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