甲醛法测定氨基酸总量－《生物化学实验》成果

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型验证性教学时数 3一、实验目的学习用指示剂滴定法测定氨基酸含量。由于这两个基团的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法相近，单指示剂法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液pH作为麝香草酚酞的终点。

实验类型验证性

教学时数 3

一、实验目的

学习用指示剂滴定法测定氨基酸含量。

二、实验原理

1.单指示剂甲醛滴定法

氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有—COOH显示酸性，又含有—NH₂显示碱性。由于这两个基团的相互作用，使氨基酸成为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，—NH₂与甲醛结合，其碱性消失，破坏内盐的存在，就可用碱来滴定—COOH，以间接方法测定氨基酸的量，反应式可能以下面三种形式存在。

2.双指示剂甲醛滴定法

与单指示剂法相同，只是在此法中使用了两种指示剂。从分析结果看，双指示剂甲醛滴定法与亚硝酸氮气容量法相近，单指示剂法稍偏低，主要因为单指示剂甲醛滴定法是以氨基酸溶液pH作为麝香草酚酞的终点。pH在9.2，而双指示剂是以氨基酸溶液的pH作为中性红的终点，pH为7.0，从理论计算看，双指示剂法较为准确。

三、实验仪器与试剂

1.仪器

铁架台、滴定管、烧杯、锥形瓶。

2.试剂

40%中性甲醛溶液、0.1%麝香草酚酞乙醇溶液、0.100mol/L氢氧化钠标准溶液，0.1%中性红（50%乙醇溶液）。

四、实验内容

1.单指示剂甲醛滴定法

称取一定量样品（约含20mg的氨基酸）于烧杯中（如为固体加水50mL），加2～3滴指示剂，用0.100mol/L NaOH溶液滴定至淡蓝色。加入中性甲醛20mL，摇匀，静置1min，此时蓝色应消失。再用0.100mol/L NaOH溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液体积（mL），用下述公式计算：(www.chuimin.cn)

氨基酸态氮（%）=（NV ×0.014×100）/W

式中 N——NaOH标准溶液当量浓度；

V——NaOH标准溶液消耗的总量，mL；

W——样品溶液相当样品质量，g；

0.014——氮的毫克当量。

2.双指示剂甲醛滴定法

取相同的两份样品，分别注入100mL三角烧瓶中，一份加入中性红指示剂2～3滴，用0.100mol/L NaOH溶液滴定终点（由红变琥珀色），记录用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20mL，摇匀，以0.100mol/L NaOH准溶液滴定至淡蓝色。按下述公式计算。

氨基酸态氮（%）=[N（V₂-V₁）×0.014]/W ×100

式中 V₂——用麝香草酚酞为指示剂时标准碱液消耗量，mL；

V₁——用中性红作指示剂时碱液的消耗量，mL；

N——标准碱液当量浓度；

W——样品的质量，g；