生物化学实验：十层析法成功分离氨基酸

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型综合性教学时数 6操作视频一、实验目的通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理和操作方法。

实验类型综合性

教学时数 6

操作视频

一、实验目的

通过氨基酸的分离，学习纸层析法的基本原理和操作方法。

二、实验原理

纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法，层析溶剂由有机溶剂和水组成。

物质被分离后在纸层析图谱上的位置是用R_f值（比移值）来表示的：

R _f=原点到层析点中心的距离/原点到溶剂前沿的距离

在一定条件下某物质的R_f值是常数，R_f的大小与物质的结构，性质、溶剂系统、层析滤纸的质量、层析温度等因素有关，本实验利用层析法分离氨基酸。

三、实验仪器与试剂

1.仪器

层析缸、毛细管、喷雾器、培养皿、层析滤纸、吹风机、小烧杯。(www.chuimin.cn)

2.试剂

扩展剂（正丁醇∶醋酸=4∶1）、0.5%氨基酸溶液（赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸溶液及混合氨基酸溶液）、0.1%水合茚三酮正丁醇溶液（显色剂）。

四、实验内容

（1）将盛有平衡溶剂的小烧杯置于密闭的层析缸中。

（2）取层析滤纸（长22cm ×宽14cm）一张，在纸的一端距边缘2cm处用铅笔划一条直线，在此直线上每隔2cm作一记号。

（3）点样：用毛细管将各氨基酸样品分别点在这六个位置上，干后再点一次，每点在纸上扩散的直径最大不超过3mm。

（4）扩展：用线将滤纸缝成筒状，纸的两边不能接触。将盛有20mL扩展剂的培养皿迅速置于密闭的层析缸中，并将滤纸直立于培养皿中（点样的一端在下，扩展剂的液面需低于点样线 1cm）。待溶液上升 15～20cm时即取出滤纸，用铅笔描出溶剂前沿界线自然干燥或用热风吹干。

（5）显色：用喷雾器均匀喷上0.1%茚三酮正丁醇溶液然后置烘箱中烘烤5min（100℃）或用热风吹干即可显出各层析斑点。

（6）计算各种氨基酸的R_f值。

五、思考题

纸层析法分离氨基酸的原理是什么？