实验九：蛋白质沉淀与变性

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型验证性教学时数 3操作视频一、实验目的加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。蛋白质变性并不一定沉淀，沉淀也并不一定变性。

实验类型验证性

教学时数 3

操作视频

一、实验目的

（1）加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。

（2）了解蛋白质变性与沉淀的关系。

（3）学习沉淀蛋白质的几种方法。

二、实验原理

在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水胶体颗粒，在一定理化因素影响下蛋白质颗粒可失去电荷或脱水而沉淀。蛋白质的沉淀反应可分为两类：

（1）可逆性沉淀反应蛋白质分子的结构尚未发生显著性变化，除去引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶于原来的溶剂中，并保持其天然性质而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（丙酮）短时间作用于蛋白质，提纯蛋白质常用此类反应。

（2）不可逆性沉淀反应蛋白质分子的结构发生重大改变，蛋白质常变性而沉淀，不再溶于原来的溶剂中，如加热，与重金属离子或某些有机酸的反应就属于此类反应。蛋白质变性并不一定沉淀，沉淀也并不一定变性。

三、实验仪器与试剂

1.仪器

离心机。(www.chuimin.cn)

2.试剂

（NH₄）₂SO₄结晶粉末、饱和的（NH₄）₂SO₄溶液、5%卵清蛋白、3%硝酸银、5%三氯乙酸、95%乙醇。

四、实验内容

1.盐析

取5%的卵清蛋白溶液5mL，加入50%的（NH₄）₂SO₄溶液5mL静置数分钟，待球蛋白析出。过滤，向滤液中加（NH₄）₂SO₄结晶粉末直到不能溶解为止，待清蛋白析出。离心，取出沉淀，向沉淀中加水，观察是否溶解。

2.重金属离子沉淀蛋白质

取5%卵清蛋白溶液2mL，加入1～2滴3%的硝酸银，观察沉淀析出。离心，取出沉淀，向沉淀中加水，观察是否溶解。

3.有机酸沉淀蛋白质

取5%卵清蛋白溶液2mL，加入1mL 5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出上清液，向沉淀中加少量水，观察是否溶解。

4.有机溶剂沉淀蛋白质

取1支试管加入2mL蛋白质溶液和2mL 95%乙醇溶液，混匀，观察沉淀生成，取沉淀加水观察沉淀是否溶解。

五、思考题

分析几种蛋白质沉淀方法的原理，并判断其是否为可逆性沉淀反应。