核酸及其衍生物核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在260nm波长处。因此，测定未知浓度核酸溶液的A260值，即可计算出其中RNA或DNA的含量。通常蛋白质的最大吸收峰在280nm波长处，在260nm处的吸收值仅为核酸的1/10或更低，因此对于含有微量蛋白质的核酸样品，测定误差较小。选择厚度为1cm的石英比色杯，于紫外分光光度计上260nm波长处测定A值。......
2023-11-06
如何测定碘值|生物化学实验
【摘要】：实验类型 验证性教学时数 6一、实验目的掌握测定碘值的原理及操作方法。本实验用硫代硫酸钠滴定过量的溴化钾与碘化钾反应放出的碘，以求出与脂肪加成的碘量。将样品和小管一起放入两个干燥的碘值测定瓶内，切勿使油粘在瓶颈或壁上。
实验类型 验证性
教学时数 6
一、实验目的
（1）掌握测定碘值的原理及操作方法。
（2）了解测定碘值的意义。
二、实验原理
脂肪中的不饱和脂肪酸碳链上有不饱和键，可以吸收卤素（Cl2，Br2或I2），不饱和键数目越多，吸收的卤素也越多。每100g脂肪，在一定条件下所吸收的碘的克数，称为该脂肪的碘值。碘值越高，不饱和脂肪酸的含量越高。因此对于一个油脂产品，其碘值是处在一定范围内的。油脂工业中生产的油酸是橡胶合成工业的原料，亚油酸是医药上治疗高血压药物的重要原材料，它们都是不饱和脂肪酸；而另一类产品如硬脂酸是饱和脂肪酸。如果产品中掺有一些其他脂肪酸杂质，其碘值会发生改变，因此碘值可被用来表示产品的纯度，同时推算出油、脂的定量组成。在生产中常需测定碘值，如判断产品分离去杂（指不饱和脂肪酸杂质）的程度等。
测定碘值的方法很多，如氯化碘—乙醇法、氯化碘—乙酸法、碘酊法、溴化法、溴化碘法等。各方法不同点在于加成反应时卤素的结合状态和对卤素采用的溶剂不同。
本实验用硫代硫酸钠滴定过量的溴化钾与碘化钾反应放出的碘，以求出与脂肪加成的碘量。
IBr+KI—→KBr+I2
I2+2Na2S2O3—→2NaI+Na2S4O6
三、实验仪器与试剂
1.材料
花生油或猪油。
2.仪器
碘值滴定瓶（250～300mL），量筒（10，50mL），样品管（直径约0.5cm，长2.5cm），滴定管（50mL），分析天平。
3.试剂
（1）纯四氯化碳。
（2）1%淀粉溶液（溶于饱和氯化钠溶液中）。(www.chuimin.cn)
（3）10%碘化钾溶液。
（4）汉诺斯（Hanus）溶液 取12.2g碘，放入1500mL锥形瓶内，徐徐加入1000mL冰醋酸（99.5%），边加边摇，同时略加温热，使碘溶解。冷却后，加溴约3mL。
注意：所用冰醋酸不应含有还原物质。取2mL冰醋酸，加少许重铬酸钾及硫酸。若呈绿色，则证明有还原物质存在。
（5）0.05mol/L标准硫代硫酸钠溶液 将结晶硫代硫酸钠50g，放在经煮沸后冷却的蒸馏水中（无CO2存在）。添加硼砂7.6g或氢氧化钠1.6g。（硫代硫酸钠溶液在pH9～10最稳定）。稀释到2000mL后，用标准0.02mol/L碘酸钾溶液按下法标定：准确地量取0.02mol/L碘酸钾溶液20mL、10%碘化钾溶液10mL和0.5mol/L硫酸20mL，混合均匀。以 1%淀粉溶液作指示剂，用硫代硫酸钠溶液进行标定。按下列反应式计算硫代硫酸钠溶液浓度后，用水稀释至0.1mol/L。
3H2SO4+5KI+KIO3—→2K2SO4+3H2O+3I2
I2+2Na2S2O3—→2NaI+Na2S4O6
四、实验内容
用玻璃小管（约0.5cm ×2.5cm）准确称量0.3～0.4g花生油（或者约0.1g蓖麻油，约0.5g猪油）2份。将样品和小管一起放入两个干燥的碘值测定瓶内，切勿使油粘在瓶颈或壁上。各加四氯化碳10mL，轻轻摇动，使油全部溶解。用滴定管仔细地向每个碘值测定瓶内准确加入汉诺斯（Hanus）溶液25mL，勿使溶液接触瓶颈。塞好玻璃塞，在玻璃塞与瓶口之间加数滴10%碘化钾溶液封闭缝隙，以防止碘升华溢出造成测定误差。然后，在20～30℃暗处放置30min。根据经验，测定碘值在110g/100g以下的油脂时放置30min，碘值高于此值则需放置1h；放置温度应保持20℃以上，若温度过低，放置时间应增至2h。放置期间应不时摇动。卤素的加成反应是可逆反应，只有在卤素绝对过量时，该反应才能进行完全。所以油吸收的碘量不应超过汉诺斯（Hanus）溶液所含碘量的一半。若瓶内混合液的颜色很浅，表示油用量过多，应再称取较少量的油，重做。
放置30min后，立刻小心打开玻璃塞，使塞旁碘化钾溶液流入瓶内，切勿丢失。用新配制的10%碘化钾10mL和蒸馏水50mL把玻璃塞上和瓶颈上的液体冲入瓶内，混匀。用0.05mol/L硫代硫酸钠溶液迅速滴定至瓶内溶液呈浅黄色。加入1%淀粉约1mL，继续滴定。将近终点时，用力振荡，使碘由四氯化碳全部进入水溶液内。再滴至蓝色消失为止，即达到滴定终点。用力振荡是滴定成败的关键之一，否则容易滴过头或不足。如果振荡不够，四氯化碳层呈现紫色或红色，此时需继续用力振荡使碘全部进入水层。
滴定完毕放置一段时间后，滴定液应变回蓝色，否则就表示滴定过量。另作两份空白对照，除不加油样品外，其余操作同上。滴定后，将废液倒入废液瓶，以便收回四氯化碳。
注意：实验中使用的仪器，包括碘值测定瓶、量筒、滴定管和称样品用的玻璃小管，都必须是洁净、干燥的。
五、实验结果与计算
碘值表示100g脂肪所能吸收的碘的质量，因此样品的碘值计算如下：
式中 A——滴定空白用去的硫代硫酸钠溶液平均体积，mL；
B——为滴定样品用去的硫代硫酸钠溶液平均体积，mL；
C——为样品质量，g；
T——与1mL 0.05mol/L硫代硫酸钠溶液相当的碘的质量。
测定脂肪酸和其他脂类物质的碘值时，操作方法完全相同。
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