蒽酮比色法测定生物化学实验中总糖含量

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：实验类型综合性教学时数 6一、实验目的掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。样品液的测定取4支试管，按下表加样。

实验类型综合性

教学时数 6

一、实验目的

掌握蒽酮比色法测糖的原理和方法。

二、实验原理

蒽酮比色法是一个快速而简便的定糖方法。蒽酮可以与游离的己糖或多糖中的己糖基、戊糖基及己糖醛酸起反应，反应后溶液呈蓝绿色，在620nm处有最大吸收。

本法多用于测定糖原的含量，也可用于测定葡萄糖的含量。

三、实验仪器与试剂

1.材料

马铃薯干粉。

2.仪器

可调试移液器或移液管、可见分光光度计（723型）、电子分析天平、水浴锅、电炉。

3.试剂

（1）蒽酮试剂取2g蒽酮溶解到80% H₂SO₄中，以80% H₂SO₄定容到1000mL，当日配制使用。

（2）标准葡萄糖溶液（0.1mg/mL）100mg葡萄糖溶解到蒸馏水中，定容到1000mL备用。(www.chuimin.cn)

四、实验内容

1.制作标准曲线

取7支干燥洁净的试管，按下表顺序加入试剂，进行测定。以吸光度值为纵坐标，各标准溶液浓度（mg/mL）为横坐标作图得标准曲线。

2.样品含量的测定

（1）样品液的制作精确称取马铃薯干粉0.1g置于锥形瓶中，加入30mL沸水。沸水浴30min（不时摇动），取出，3000r/min离心10min（或过滤）。反复洗涤残渣2次，合并滤液，冷却至室温。定容到50mL的锥形瓶中，再从中取出1mL，再定容到10mL的容量瓶中。

（2）样品液的测定取4支试管，按下表加样（加蒽酮时需要冰水浴5min冷却）。

加样冷却完成后置沸水中煮沸10min，取出流水冷却放置10min，620nm处比色测量各管OD值。

以1号试管作为调零管，2、3、4号管的O D值取平均后从标准曲线上查出样品液相应的含糖量。

五、实验结果与计算

式中 w——糖的质量分数，%；

C——从标准曲线中查出的糖质量分数，mg/mL；

V——样品稀释后的体积，mL；

m——样品的质量，mL。