糖的呈色反应及定性鉴定-生物化学实验

2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：掌握塞氏实验鉴定酮糖的原理和方法。5.实验现象记录仔细观察实验中的颜色变化，对于塞氏试验和杜氏试验还需记录颜色变化的时间。

实验类型验证性

教学时数 6

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一、实验目的

（1）掌握莫氏（Molisch）实验鉴定糖的原理和方法。

（2）掌握塞氏（Seliwanoff）实验鉴定酮糖的原理和方法。

（3）掌握杜氏（Tollen）实验鉴定酮糖的原理和方法。

（4）掌握班氏（Benedict）实验鉴定还原性糖的原理和方法。

二、实验原理

1.莫氏实验

糖经无机酸（浓硫酸、浓盐酸）脱水产生糠醛或糠醛衍生物，后者在浓无机酸作用下，能与α—萘酚生成紫红色缩合物。

2.塞氏实验

酮糖在浓酸的作用下，脱水生成5—羟甲基糠醛，后者与间苯二酚作用，呈红色反应；有时亦同时产生棕红色沉淀，此沉淀溶于乙醇，成鲜红色溶液。

3.杜氏实验

戊糖在浓酸溶液中脱水生成糠醛，后者与间苯三酚结合成樱桃红色物质。

4.班氏实验

柠檬酸钠和Cu²⁺生成络离子，此络离子与葡萄糖中的醛基反应生成红黄色沉淀。

三、实验仪器与试剂

1.仪器(www.chuimin.cn)

水浴锅、试管、胶头滴管。

2.试剂

（1）莫氏试剂α—萘酚5g，溶于95%乙醇并稀释至 100mL。现用现配，并贮于棕色试剂瓶中。

（2）塞氏试剂间苯二酚50mg，溶于100mL盐酸（V_H2O∶V_HCl=2∶1），现用现配。

（3）杜氏试剂 2%间苯三酚乙醇溶液（2g间苯三酚溶于100mL 95%乙醇中）3mL，缓缓加入浓盐酸15mL及蒸馏水9mL。临用时配制。

（4）班氏试剂 173g柠檬酸钠和100g无水碳酸钠溶解于800mL水中。再取17.3g结晶硫酸铜溶解在100mL水中，慢慢将此溶液加入上述溶液中，最后用水稀释到1L，当溶液不澄清时可过滤。

（5）其他试剂 1%葡萄糖溶液，1%蔗糖溶液，1%淀粉溶液，1%果糖溶液，1%半乳糖溶液，1%阿拉伯糖溶液，纤维素，浓硫酸。

四、实验内容

1.莫氏实验

于4支试管中，分别加入1mL 1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%淀粉溶液和少许纤维素（棉花或滤纸浸在1mL水中），然后各加莫氏试剂2滴，摇匀，将试管倾斜，沿管壁慢慢加入浓硫酸1.5mL（切勿振摇。），硫酸层沉于试管底部与糖溶液分成两层，观察液面交界处有无紫色环出现。

2.塞氏实验

于3支试管中，分别加入0.5mL 1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液，然后各加塞氏试剂2.5mL，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。

3.杜氏实验

于3支试管中加入杜氏试剂1mL，再分别加入1滴1%葡萄糖溶液、1%半乳糖溶液和1%阿拉伯糖溶液，混匀。将试管同时放入沸水浴中，观察颜色的变化，并记录颜色变化的时间。

4.班氏实验

于5支试管中，分别加入 1mL 1%葡萄糖溶液、1%蔗糖溶液、1%果糖溶液、1%麦芽糖溶液和1%淀粉溶液，然后各加班氏试剂1mL，摇匀，同时置沸水浴内，比较各管颜色及红色出现的先后顺序。

5.实验现象记录

仔细观察实验中的颜色变化，对于塞氏试验和杜氏试验还需记录颜色变化的时间。