不同酶解条件对酶解产物DPPH自由基清除能力研究

2023-10-28 理论教育版权反馈

【摘要】：对不同条件下的蛋白质水解液稀释50倍，测定其DPPH清除能力。如图4-2所示为不同酶解条件下获得的烟叶蛋白多肽对DPPH自由基清除能力。综合可知，得到的烟叶蛋白多肽DPPH自由基清除率，木瓜蛋白酶组最高为43.51%，对应的烟叶蛋白酶解条件为酶解温度40℃，酶解时间2h，加酶量3%，pH为7。

对不同条件下的蛋白质水解液稀释50倍，测定其DPPH清除能力。取3支试管，1支为试验组，1支为对照组，1支为空白组。试验组加1mL蛋白质水解液，3mL DPPH溶液，漩涡振荡器混匀，避光放置30min，以50%乙醇溶液调零，于517nm处测定其吸光度，记为A_i；对照组加入1mL蒸馏水，3mL DPPH溶液，方法同上，测得吸光度记为A₀；空白组加1mL蛋白质水解液，3mL 50%乙醇，测得吸光度记为A_j。每组试验设置三次平行。不同条件下的蛋白质水解液设置一组试验。蛋白质水解液对· DPPH清除率的计算公式如（4-2）所示。

如图4-2所示为不同酶解条件下获得的烟叶蛋白多肽对DPPH自由基清除能力。

图4-2（1）所示，胰蛋白酶组烟叶蛋白多肽的DPPH自由基的清除能力均很低；木瓜蛋白酶组烟叶蛋白多肽对DPPH自由基的清除率在温度为40℃时达到最高值43.51%，也就是说，其他条件不变时，温度为40℃时木瓜蛋白酶对烟叶蛋白质的水解产物抗氧化性最佳；复合蛋白酶组在50℃时达到最高值28.55%。图4-2（2）中可以看出随着酶解时间的增加，胰蛋白酶组的多肽·DPPH清除率差异仍不显著，且抗氧化性很低；木瓜蛋白酶组在2h左右产生的烟叶蛋白多肽的· DPPH清除率最高，为43.02%。复合蛋白酶组，随时间增加抗氧化性先增加后减少，在酶解时间为1h时，获得的烟叶蛋白多肽·DPPH清除率最高为36.71%。图4-2（3）胰蛋白酶组的多肽变化与之前相似；木瓜蛋白酶组和复合蛋白酶组在加酶量大于3%时产生的烟叶蛋白多肽的·DPPH清除率相似，3%加酶量时清除率分别为27.70%和43.30%；图4-2（4）胰蛋白酶组的烟叶蛋白多肽DPPH自由基清除率很低，pH的变化对其影响不大；木瓜蛋白酶组在pH为7时，清除率达到最高值为44.87%；复合蛋白酶组在pH为6～8时，清除率变化不显著，pH为8时，清除率为29.33%。

图4-2 不同酶解条件下获得烟叶蛋白多肽对DPPH自由基清除能力(www.chuimin.cn)

（图中相同字母表示差异不显著，不同字母表示差异显著）

虽然木瓜蛋白酶和复合蛋白酶的酶活力不同，但是在高于3%的加酶量后对·DPPH的清除率变化不明显，说明在试验条件（3%的加酶量）下烟叶蛋白多肽的·DPPH清除率达到最高水平，也就是相同条件下可以不考虑两种酶酶活力不同对DPPH自由基清除率的影响。

综合可知，得到的烟叶蛋白多肽DPPH自由基清除率，木瓜蛋白酶组最高为43.51%，对应的烟叶蛋白酶解条件为酶解温度40℃，酶解时间2h，加酶量3%，pH为7。

不同酶解条件对酶解产物DPPH自由基清除能力研究

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