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2023-10-28
3.2.1.1 GC/MS法处理多糖样品
准确称取精制多糖0.005g于具塞试管中,加入2mol/L的三氟乙酸3mL,塞上塞子,121℃下水解2h;然后,用0.22μm的有机系滤膜过滤,取清液2mL,蒸干,加入吡啶1.5mL、衍生试剂BSTFA∶TMCA(99 ∶1)0.1mL;于室温密闭保存24h,即可用于进样分析。
色谱条件:HP-5色谱柱60m × 0.25mmol/L × 0.25μm;载气为氦气,流速为1mL/min;程序升温80℃,保持1min,以5℃/min的速度升温至280℃并保持20min。进样量为1μL,分流比为5∶1。
MS分析条件:溶剂延迟7min,扫描范围35~455aum,进样口280℃,传输线温度280℃,EI能量70eV,离子源温度230℃,四极杆温度160℃。
3.2.1.2 废弃烟叶多糖的单糖组成
对废弃烟叶多糖的两个组分Fr-Ⅰ和Fr-Ⅱ分别进行单糖分析,结果如表3-2和表3-3所示。由表3-2可以看出,Fr-Ⅰ中主要单糖成分为D-木糖33.70%、L-鼠李糖15.88%、D-半乳糖8.32%,而D-葡萄糖和D-甘露糖的含量则相对较少,分别为0.23%和0.70%。同样的,由表3-3可以看出,Fr-Ⅱ中主要单糖成分为D-葡萄糖26.57%、L-鼠李糖17.87%、L-甘露糖9.80%,而D-半乳糖和D-阿拉伯糖含量相对较少,分别为1.00%和0.88%。
表3-2 Fr-Ⅰ气相色谱分析
表3-3 Fr-Ⅱ气相色谱分析
续表(www.chuimin.cn)
废弃烟叶多糖组分Fr-Ⅰ和组分Fr-Ⅱ的红外光谱图分别如图3-3和图3-4所示。首先,3308.3cm-1和3293.0cm-1处吸收峰是由多糖中O—H的伸缩振动引起的;2923.3cm-1和2928.0cm-1处的吸收峰是由—CH3不对称伸缩引起的;2360.8cm-1和2361.1cm-1处吸收峰为C═N或C═C的伸缩振动;1605.6cm-1和1592.4cm-1处的吸收峰可能是—COO—中C═O的非对称伸缩振动引起的;1413.2cm-1、1378.9cm-1、1369.7cm-1处是由多糖中的C—H的变角振动引起的;1248.5cm-1处有强吸收峰说明有乙酰基存在;1200~1000cm-1的强吸收峰是吡喃糖环的醚键(C—O—C)和羟基的吸收峰;910~880cm-1处有吸收但分离效果不好,说明两个组分应有β-糖苷键;792cm-1处是具有甘露糖结构的特征峰;610.7cm-1、568.5cm-1可能是溶剂残留峰。分析可知,两个多糖组分经红外光谱分析均有典型糖类物质的特征吸收峰,1650~1500cm-1有吸收谱带,说明两个组分都可能有蛋白质存在,推测其Fr-Ⅰ可能是一种含蛋白的β-吡喃型酸性甘露糖,Fr-Ⅱ可能是一种部分乙酰化的酸性多糖。
图3-3 Fr-Ⅰ红外光谱图
图3-4 Fr-Ⅱ红外光谱图
Fr-Ⅰ样品在90 °角,15℃测量温度下进行测定。由动态光散射法计算出的平均粒径是27.337nm,多分散性指数是0.5098,粒径分布如图3-5所示,Fr- Ⅰ的分布较宽,从 2 × 10 -3~1μm都有分布,但平均粒径在27nm。
Fr-Ⅱ样品在90 °角,15℃测量温度下进行测量,并由动态光散射法计算出的平均粒径是77.446nm,多分散性指数是0.3129,粒径分布如图3-6所示,Fr-Ⅱ样品分布较窄,有很少一部分粒径在几纳米,其他则是在100nm左右,平均粒径是73nm。
图3-5 Fr-Ⅰ粒径分布图
图3-6 Fr-Ⅱ粒径分布图
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