多糖的提取和精制过程如下。除烟叶色素 称取50g烟末,分别用500mL乙酸乙酯和丙酮在索氏提取器中浸提至溶液无明显颜色变化,取出烟末,烘干。浓碱提取 将最后的沉淀用500mL 0.05% NaBH4+5% NaOH混合溶液浸提24h,离心,保留上清液,沉淀继续重复此步骤一次,合并两次上清液,得到粗多糖提取液。多糖的精制 将溶液旋转蒸发浓缩,透析袋透析4d,将透析液旋转蒸发浓缩,转移至培养皿中,冷冻干燥得到粗多糖。......
2025-09-30
2.4.1.1 ·OH的清除能力的测定
配制浓度梯度分别为5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL、30mg/mL的烟秆多糖溶液10mL。取8支试管,其中6支为试验组,1支作为对照组,1支为空白组。向试验组中加入1mL多糖溶液,1mL 0.02mmol/L磷酸缓冲液(pH为7.4,PBS),1mL 7.5mmol/L的邻二氮菲溶液,摇匀,再加入1mL 3.25mmol/L FeSO4溶液,充分混合后再加入1mL 1.5%H2O2,于37℃恒温1h,用紫外分光光度计在510nm处以蒸馏水调零测得吸光度值记为Ai。空白组以蒸馏水代替1mL多糖溶液,记吸光度值为A0。对照组以蒸馏水代替1mL多糖溶液和1mL 1.5% H2O2,测得吸光度为Aj。烟秆多糖对·OH清除率的计算公式如式(2-1)所示。
2.4.1.2 烟秆多糖对·DPPH清除能力的测定
配制浓度梯度为2mg/mL、4mg/mL、6mg/mL、8mg/mL、10mg/mL的烟秆多糖溶液10mL。取11支试管,5支为试验组,5支为对照组,1支为空白组。向试验组分别加入1mL多糖溶液、3mL 50%乙醇配制的2mmol/L的DP-PH溶液,混匀后,放暗处0.5h,以50%乙醇溶液调零于517nm处测定其吸光度Ai;向空白组分别加入3mL 50%乙醇配制的2mmol/L的DPPH溶液、1mL蒸馏水,517nm处测定其吸光度A0;向对照组分别加入对应浓度的1mL多糖溶液、3mL 50%乙醇,于517nm处测定其吸光度为Aj。多糖对·DPPH清除率的计算公式如式(2-2)所示。(https://www.chuimin.cn)
烟秆多糖对·OH和·DPPH的清除率如图2-7所示。由图2-7(1)可以看出,随着多糖浓度的增加,对·OH的清除率也增加,多糖浓度在30mg/mL的时候对·OH的清除率达到61.11%。在图2-7(2)中显示出,在较低的多糖浓度(2~6mg/mL)时,随着多糖浓度的增加对·DPPH的清除率变化不大,但当浓度继续增大时· DPPH的清除率增加显著,当浓度达到10mg/mL时,对·DPPH的清除率达到73.21%。两个结果都表明,烟秆多糖具有良好的抗氧化活性。结合烟秆多糖的结构分析,这种抗氧化活性可能是由于多糖分子中大量的羧基(—COOH)、羰基(C═O)、醚基(—O—)等结构,这些基团可以提供电子使自由基以一种更稳定的形式存在,或者使自由基引起的链式反应终止。
图2-7 不同多糖浓度对·OH和·DPPH清除率的影响
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