多糖的提取和精制过程如下。除烟叶色素 称取50g烟末,分别用500mL乙酸乙酯和丙酮在索氏提取器中浸提至溶液无明显颜色变化,取出烟末,烘干。浓碱提取 将最后的沉淀用500mL 0.05% NaBH4+5% NaOH混合溶液浸提24h,离心,保留上清液,沉淀继续重复此步骤一次,合并两次上清液,得到粗多糖提取液。多糖的精制 将溶液旋转蒸发浓缩,透析袋透析4d,将透析液旋转蒸发浓缩,转移至培养皿中,冷冻干燥得到粗多糖。......
2025-09-30
对烟秆多糖进行酸水解,然后进行HPLC单糖分析,方法见多糖样品处理章节。分析结果如图2-3所示,根据标准样品的保留时间,确定多糖水解样品中含有的单糖分别为葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、甘露糖/半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖,其中因Aminex HPX-87H色谱柱对糖分析的限制,无法将甘露糖、半乳糖两种糖分离开,所以不能确定是其中哪一种或多种,有待进一步研究。将其中各种多糖进行面积归一化处理,得到表2-1数据,可以看出烟秆多糖是一种杂多糖,其中各种单糖的组成及含量分别为葡萄糖醛酸 8.76%,半乳糖醛酸 12.80%,葡萄糖 11.47%,甘露糖/半乳糖42.88%,鼠李糖7.25%,阿拉伯糖16.84%。
图2-3 烟秆多糖的HPLC图
1—葡萄糖醛酸 2—半乳糖醛酸 3—葡萄糖 4—甘露糖/半乳糖 5—鼠李糖 6—阿拉伯糖
表2-1 烟秆多糖的单糖组成
烟秆多糖的红外分析光谱图,如图2-4所示,通过对红外光谱吸收图分析,在 3440cm-1处有强而宽的吸收峰,为—OH的O—H伸缩振动;2930cm-1处较强的吸收峰是由于—CH3或—CH2的C—H伸缩振动引起;1650cm-1处的红外吸收峰是由于N—H的变角振动,可能含有氨基或酰胺基的结构,进一步说明多糖中含有蛋白质;1420cm-1和1260cm-1处的红外吸收峰,是C—O伸缩振动和O—H面内变形振动的偶合引起,可能含有羧基;1000cm-1处为C—O键的伸缩振动峰,为典型的吡喃糖红外光谱图;890cm-1处的红外吸收峰为β-构型多糖的异头碳伸缩振动峰。由之前的紫外检测表明烟秆多糖中含有蛋白质,从而推测烟秆多糖为结合少量蛋白质β-构型的吡喃杂多糖。
图2-4 烟秆多糖的红外光谱图(https://www.chuimin.cn)
烟秆多糖的SEC/MALLS参数,如表2-2所示。
表2-2 烟秆多糖的SEC/MALLS参数表
图2-5是烟秆多糖重均分子质量(Mw)、光散射(LS)和示差信号(dRI)与流出时间的关系图。从图2-5中可以看出多糖的重均分子质量为145000~19000g/mol。从表2-2中可以看出烟秆多糖的Mw为3.142 × 104。多分散系数dn=Mw/Mn,dn越接近 1,试样越均一。烟秆多糖中的dn=1.247,接近于1,说明多糖分子的质量分布较窄,均一性较好。均方根旋转半径对分子质量的关系可用
关系式表示,该关系式的α值也可用于推断高分子在溶液中的链构象。通常,α值为1、0.5~0.6和0.33时,分别表示高分子在溶液中呈现刚性棒状链、无规线团和球形链构象。对于支化高分子,α值一般小于0.5,有时甚至低于0.33。将烟秆多糖的
=14.1nm,对
与Mw的双对数作图,如图2-6所示,分子质量小于20000g/mol时为部分Ⅰ,分子质量大于20000g/mol时的部分为Ⅱ,当分子质量小于20000g/mol时不适合均方根旋转半径与重均分子质量双对数关系模型,只讨论Ⅱ部分。对Ⅱ部分的双对数模型进行拟合,得到的直线斜率α为0.188,从而可知,多糖在水中构象为球形,并且高度支化。
图2-5 烟秆多糖Mw、LS和dRI与流出时间的关系图
图2-6 烟秆多糖均方根旋转半径与重均分子质量双对数关系图
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