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卵磷脂的检测方法及应用探析

【摘要】:在保健品中使用的主要是磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸,本方法只包括PC和PS的定量测试。②样品液的配制:称取一定量含有约20 mg磷脂酰胆碱或磷脂酰丝氨酸的样品,转入25 mL容量瓶中,加入10 mL温水,超声5 min清洗样品,然后尽可能多地移去清洗液,再加入10 mL氯仿和5 m L乙醇,超声10 min,冷却后再加入乙醇至刻度,摇匀后离心5 min,吸取清液即可注射。

磷脂(lecithin)主要包括磷脂酰胆碱(phosphatidycholine,PC)、脑磷脂(phosphatidylethanolamine,PE)、磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol,PI)和磷脂酰丝氨酸(phosphatidtserine,PS)。

保健品中使用的主要是磷脂酰胆碱(PC)和磷脂酰丝氨酸(PS),本方法只包括PC和PS的定量测试。

PC和PS分子都是一端极性,另一端非极性,由于非极性这一端的碳链特别长,所以非极性很强,用反相柱很难把它们洗脱下来并分离。本方法是用正相柱来进行测试。

从理论上来说,卵磷脂分子中的脂肪酸是可变的,相对分子质量是不固定的,但是在实际测试中可以得到单一的峰。这可能是由于在生产过程中选择了不同的溶剂来进行有选择性地提取以及随后的分离和纯化过程使最终产品单一化了。

(1)测试步骤

①标准液的配制:准确称取20 mg磷脂酰胆碱和磷脂酰丝氨酸标准品,转入25 m L容量瓶中,加入10 m L氯仿,超声至标准品全部溶解,冷却后加入乙醇至刻度,摇匀后即可注射。

②样品液的配制:称取一定量含有约20 mg磷脂酰胆碱或磷脂酰丝氨酸的样品,转入25 mL容量瓶中,加入10 mL温水,超声5 min清洗样品,然后尽可能多地移去清洗液,再加入10 mL氯仿和5 m L乙醇,超声10 min,冷却后再加入乙醇至刻度,摇匀后离心5 min,吸取清液即可注射。

(2)HPLC条件

色谱柱:Supelcosil LC-SCX,5μm,250×4.6 mm

流速:1.0 m L/min

注射量:15μL

UV检测波长:215 nm

移动相A:650 mL p H 3.5缓冲液(50 mmol KH2PO4磷酸),加350 mL乙腈

移动相B:甲醇

柱温:室温

移动相A∶移动相B=20∶80

(3)结果计算

A:标准液磷脂酰胆碱的峰面积

A:样品液磷脂酰胆碱的峰面积

V:标准液的总体积(m L)

V:样品液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :磷脂酰胆碱标准品的质量(mg)

A:标准液磷脂酰丝氨酸的峰面积

A:样品液磷脂酰丝氨酸的峰面积

V:标准液的总体积(m L)

V:样品液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :磷脂酰丝氨酸标准品的质量(mg)