5-磷酸吡哆醛测定方法简介

2023-07-02 理论教育版权反馈

【摘要】：5-磷酸吡哆醛是维生素B6体现生物活性的一种形式。5-磷酸吡哆醛是极性分子，等电点大约在2.9。③样品液的配制：称取一定量碾碎的含有约10 mg 5-磷酸吡哆醛的样品，转入100 mL容量瓶中，加入60 mL 0.1 mol／L盐酸，振荡2 min，超声10 min，冷却后再加入0.1 mol／L盐酸至刻度，摇匀，离心5 min，吸取清液即可注射。

5-磷酸吡哆醛（pyridoxal- 5-phosphate，P5P）是维生素B6（pyridoxin）体现生物活性的一种形式。

5-磷酸吡哆醛是极性分子，等电点大约在2.9。为了延长保留时间，可有3个选择：一是把移动相p H调节至等电点2.9，使5-磷酸吡哆醛成为中性分子，增强与反相色谱柱的作用力，延长保留时间；二是把移动相p H 调节至≥5，再在移动相A中加入5 mmol／L 4-丁基铵盐做离子对，与带负电的5-磷酸吡哆醛形成离子对；三是将移动相A的p H 调节至≤1.5，在移动相A中加入10 mmol／L己烷基磺酸钠做离子对，与带正电的5-磷酸吡哆醛形成离子对，延长保留时间。

可根据实际样品来选择最适合的条件，下面介绍第一种方法。

（1）测试步骤

①p H 2.9缓冲液的配制：称取1.38 g磷酸二氢钾，转移至1 000 m L容量瓶中，加入600 m L水，水浴超声至全部溶解。用0.1 mol／L盐酸和0.01 mol／L氢氧化钠溶液调节p H 为2.9，加水至刻度，摇匀，过滤。

②标准液的配制：准确称取10 mg 5-磷酸吡哆醛标准品，转入100 mL容量瓶中，加入60 mL 0.1 mol／L盐酸，振荡至标准品全部溶解，再加入0.1 mol／L盐酸至刻度，摇匀后即可注射。

③样品液的配制：称取一定量碾碎的含有约10 mg 5-磷酸吡哆醛的样品，转入100 mL容量瓶中，加入60 mL 0.1 mol／L盐酸，振荡2 min，超声10 min，冷却后再加入0.1 mol／L盐酸至刻度，摇匀，离心5 min，吸取清液即可注射。

（2）UPLC条件

色谱柱：Acquity UPLC®HSS T3，1.8μm，2.1×150 mm

流速：0.4 m L／min

注射量：1μL

UV检测波长：295 nm

移动相A：p H 2.9缓冲液

移动相B：乙腈