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羟基色氨酸的测试方法优化

【摘要】:测试步骤①标准液的配制:准确称取5 mg 5-羟基色氨酸标准品,转入100 mL容量瓶中,加入60 m L甲醇/水混合液,振荡至标准品全部溶解,再加入甲醇/水混合液至刻度,摇匀后即可注射。②样品液的配制:称取一定量碾碎的或均匀的含有约5 mg 5-羟基色氨酸的样品,转入100 m L容量瓶中,加入10 m L水,超声5 min,再加入50 mL甲醇,超声15 min,冷却后再加入甲醇至刻度,摇匀后离心5 min,吸取上层清液即可注射。

5-羟基色氨酸(5-hydroxytrytophan,5-HTP)在有些国家被归为药物,但在美国、加拿大等国家被归为保健品,对改善睡眠及忧郁症的治疗有辅助作用。

5-羟基色氨酸是一种氨基酸,酸性条件下带正电,可与移动相的己烷基磺酸在移动相中形成离子对,以此来延长保留时间,改善峰形,提高分辨率,得到更好的分离效果。

(1)测试步骤

①标准液的配制:准确称取5 mg 5-羟基色氨酸标准品,转入100 mL容量瓶中,加入60 m L甲醇/水(80∶20)混合液,振荡至标准品全部溶解,再加入甲醇/水(80∶20)混合液至刻度,摇匀后即可注射。

②样品液的配制:称取一定量碾碎的或均匀的含有约5 mg 5-羟基色氨酸的样品,转入100 m L容量瓶中,加入10 m L水,超声5 min,再加入50 mL甲醇,超声15 min,冷却后再加入甲醇至刻度,摇匀后离心5 min,吸取上层清液即可注射。

(2)HPLC条件

色谱柱:Supelcosil Discovery RP-Amide C16,4.6×150 mm,或相似的C18柱子

流速:1.0 mL/min

注射量:10.0μL

UV检测波长:280 nm

移动相A:10 mmol/L己烷基磺酸钠水溶液,p H 2.0

移动相B:乙腈

柱温:室温

梯度

(3)结果计算

A:标准品的峰面积

A:样品的峰面积

V:标准液的总体积(m L)

V:样品液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :标准品的质量(mg)