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鱼油中ω-3的测试方法探究

【摘要】:鱼油中的ω-3主要有二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸两种。鱼油中的ω-3不是游离的脂肪酸,而是脂肪酸酯。水解后得到的游离ω-3脂肪酸可以用反相色谱来分离和定量测试。这里介绍的是UPLC-UV的方法,优点是比气相色谱方法快。

鱼油中的ω-3主要有二十碳五烯酸(eicosapentaenoic,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahexaenoic,DHA)两种。

鱼油中的ω-3不是游离的脂肪酸,而是脂肪酸酯。为了要测游离的脂肪酸,样品先要在碱性的乙醇中水解。水解后得到的游离ω-3脂肪酸可以用反相色谱来分离和定量测试。

ω-3脂肪酸可以像其他脂肪酸一样用气相色谱来测试。这里介绍的是UPLC-UV的方法,优点是比气相色谱方法快。

(1)测试步骤

①标准液的配制:准确称取5 mg二十碳五烯酸和25 mg二十二碳六烯酸标准品,转移至100 mL容量瓶中,加入60 m L乙醇,振荡至标准品全部溶解,再加乙醇至刻度,摇匀后即可注射。

②样品液的配制:称取一定量碾碎的含有约5 mg二十碳五烯酸或25 mg二十二碳六烯酸的样品(或均匀的液体样品),转入100 mL锥形瓶中,加入30 mL乙醇和800 mg氢氧化钠,在60℃的水浴中超声40 min或直到氢氧化钠全部溶解,冷却后转入100 mL容量瓶中,用少量乙醇清洗锥形瓶数次,将所有的清洗液全部转入容量瓶中,再加入乙醇至刻度,摇匀后离心5 min,吸取上层清液即可注射。

(2)UPLC条件

色谱柱:Acquity UPLC®BEH Phenyl,1.8μm,2.1×150 mm

流速:0.4 m L/min

注射量:1.0μL

UV检测波长:211 nm

移动相A:0.1%磷酸水溶液

移动相B:乙腈

柱温:45℃

梯度

图5-14 EPA和DHA的色谱图

(3)结果计算

A:二十碳五烯酸标准品的峰面积

A:样品中二十碳五烯酸的峰面积

V:标准液的总体积(m L)

V:样品液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :二十碳五烯酸标准品的质量(mg)

二十二碳六烯酸的计算同上。