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如何测试胆汁酸?

【摘要】:从以上分子结构可以看出胆汁酸都是非极性化合物,可以用C18柱来分离和定量测试。测试步骤①标准液的配制:以上每种胆汁酸分别准确称取10 mg,转入50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇,振荡2 min,水浴超声至全部溶解,冷却后再加入甲醇至刻度,摇匀后即可注射。

胆汁酸有两大类,一类是共轭胆汁酸(conjugated bile acids),有牛黄胆汁酸(taurocholic acid)、牛黄鹅胆汁酸(taurochenodeoxycholic acid)、牛黄去氧胆酸(taurodeoxycholic acid)、甘氨胆酸(glycholic acid)、甘氨鹅去氧胆酸(glycochenodeoxycholic acid);另一类是非共轭胆酸,有胆酸(cholic acid)和去氧胆酸(deoxycholic acid)等。

从以上分子结构可以看出胆汁酸都是非极性化合物,可以用C18柱来分离和定量测试。

(1)测试步骤

①标准液的配制:以上每种胆汁酸分别准确称取10 mg,转入50 mL容量瓶中,加入30 mL甲醇,振荡2 min,水浴超声至全部溶解,冷却后再加入甲醇至刻度,摇匀后即可注射。

②样品液的配制:称取一定量相当于含有约10 mg胆酸的样品,转入50 mL容量瓶中,加入5 mL水,振荡2 min,超声5 min,再加入30 mL乙醇,超声10 min,冷却后加入甲醇至刻度,摇匀,离心10 min,取上层清液即可注射。

(2)UPLC条件

色谱柱:Acquity UPLC®BEH C18,1.7μm,2.1×150 mm

流速:0.4 mL/min

注射量:2μL

UV检测波长:210 nm

移动相A:0.1%磷酸水溶液

移动相B:乙腈

柱温:45℃

梯度

(3)结果计算

A:相应标准品的峰面积

A:相应样品的峰面积

V:样品液的总体积(m L)

V:标准液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :相应标准品的质量(mg)

总胆汁酸为所有单独的胆汁酸的总和。