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2025-09-29
螺旋藻(spirulina)含有很多营养成分,如蛋白质、维生素、金属元素、类胡萝卜素等,蛋白质是螺旋藻的主要营养成分。螺旋藻含有藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白,有抗氧化和提高免疫力的功效。
藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白都是大分子,用色谱法分离和定量测试有困难。本方法是根据Yoshikawa&Belay[5]的方法修改而来的。
(1)测试步骤
标准溶液和样品溶液的配制:把样品打碎成粉末,称取300 mg螺旋藻标准品,以及相当于300 mg螺旋藻标准品的样品,分别转入不同的50 mL离心管中,分别加入25 m L 100 mmol/L磷酸钠p H 6.0的缓冲剂,用搅棒搅匀,在30℃下培养16 h。然后用搅棒搅匀后,分别离心10 min,移取1 m L清液至50 mL容量瓶中,加入100 mmol/L磷酸钠p H 6.0的缓冲剂至刻度,摇匀。若需要,可用100 mmol/L磷酸钠p H 6.0的缓冲剂进一步稀释。
(2)紫外/可见光仪读数
移取1 mL标准液或样品液至1 cm的光谱管中,分别作紫外/可见光扫描(300~700 nm)。标准液或样品液的最大吸收应该在0.3~0.9范围内,若超出范围应进一步稀释或调整。
在作定量计算前必须确认在600~700 nm 区域内样品的吸收光谱和螺旋藻标准品的光谱相似,以防掺有色素的假冒伪劣产品。
螺旋藻的藻蓝蛋白的浓度和别藻蓝蛋白的浓度之比应该是70∶30左右。
(3)结果计算
计算公式如下:
样品最大吸收(620 nm)=C C×7.20+C A×3.91
样品最大吸收(650 nm)=C C×1.67+C A×6.45
620 nm:藻蓝蛋白最大吸收波长
650 nm:别藻蓝蛋白最大吸收波长
C C:藻蓝蛋白的浓度(mg/m L)
C A:别藻蓝蛋白的浓度(mg/mL)(https://www.chuimin.cn)
7.20:1 mg/m L藻蓝蛋白在620 nm 处的吸收度
3.91:1 mg/mL别藻蓝蛋白在620 nm 处的吸收度
1.67:1 mg/mL藻蓝蛋白在650 nm 处的吸收度
6.45:1 mg/mL别藻蓝蛋白在650 nm 处的吸收度
以上公式可转换如下:
设C C为X;C A为Y
设样品最大吸收(620 nm)为A
设样品最大吸收(650 nm)为B
得:
A=X×7.20+Y×3.91
B=X×1.67+Y×6.45
解以上二元一次方程组,得:
藻蓝蛋白的浓度(X)=0.162A-0.098B
别藻蓝蛋白的浓度(Y)=0.18B-0.042A
以上就是计算藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白含量的公式。
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