天然甜菊（stevia）含有多种甜菊糖苷，甜度均为蔗糖的100～200倍，可用作甜味剂。
本方法测试天然甜菊所含的几种甜菊苷：甜菊苷（stevioside）、甜叶菊苷A（rebaudioside A）、甜叶菊苷C（rebaudioside C）、杜克苷A（dulcoside）和甜菊双糖苷（steviolbioside）。
目前市场上还有一种酶改性的甜菊糖苷，即经过酶的作用将不同的糖结合到甜菊苷原不同的碳位上，这样就产生了20多种甜菊苷，大大提高了产量，但也提高了测试难度。目前有些单位用LC-MS／MS来分离并定义了这20几种甜菊糖苷。由于标准品不易找到，对仪器设备的要求也高，对一般的实验室来说要定量测试每一种甜菊苷有难度。
为了推广测试，可以用酶或酸来水解各种甜菊苷，得到游离的糖及糖苷原，定量测试这些糖及糖苷原就可以得到水解前糖苷的总含量。当然要除去水解带来的额外的水分。为了防止假冒伪劣产品，在水解前一定要测试样品中有没有游离态的糖。根据所测到的不同糖的比例及糖与糖苷原的比例来确定不同规格的标准，这是一个比较可行的设想。
下面介绍一种测试天然甜菊的液相色谱法。
（1）测试步骤
①标准液的配制：准确称取5 mg甜菊苷标准品，转入100 mL容量瓶中，加入60 mL 50%甲醇水溶液，超声至标准品全部溶解，冷却后再加入50%甲醇水溶液至刻度，摇匀后即可注射。
②样品液的配制（提取物）：称取一定量粉碎的含有约20 mg总甜菊苷的样品，转入100 mL容量瓶中，加入60 m L 50%甲醇水溶液，振荡5 min后再超声20 min，冷却后再加入50%甲醇水溶液至刻度，摇匀，离心5 min，取清液即可注射。
样品液的配制（甜菊叶粉）：称取约1 g甜菊叶粉，转入250 m L圆底烧瓶中，加入100 m L 50%甲醇水溶液，回流1 h，冷却后取出10 mL回流液，离心5 min，取清液即可注射。
（2）HPLC条件
色谱柱：Supelco Discovery LC-NH2，5μm，4.6×250 mm
流速：1.8 m L／min
柱温：室温
注射量：20.0μL
UV检测波长：210 nm
移动相A：10 mmol／L KH2PO4，p H 5.0
移动相B：乙腈
移动相A：移动相B为90∶10
（3）结果计算
有两种计算方法：一种方法是将样品中待测物的峰与标准液中相对应的峰一一比较，根据标准品的浓度来进行计算；另一种方法是将样品中所有待测物的峰与标准液中的甜菊苷峰相比较，再乘上各自不同的转换系数，就可以得到各个相应待测物的含量。
A标：标准液中甜菊苷的峰面积
A样：相应的待测物的峰面积
V标：标准液的总体积（m L）
V样：样品液的总体积（m L）
W 样：样品的质量（mg）
W 标：甜菊苷标准品的质量（mg）
③样品液的配制：准确称取1 g紫锥菊干粉或含有等量成分的样品，转入50 mL容量瓶中，加入30 mL溶剂1，振荡1 min，在50℃水浴中超声20 min，每5 min振荡10 s。HPLC条件色谱柱：Prodigy ODSC18，5μm，4.6×250 mm，100 A移动相A：0.1%磷酸水溶液移动相B：0.1%磷酸乙腈溶液流速：1.0 m L／min柱温：室温UV 检测波长：330 nm注射量：20μL梯度：紫锥菊一共有9个不同的品种，用来做保健品的有两种：紫花紫锥菊和狭叶紫锥菊。......
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