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辣椒碱的测试方法大揭秘,

【摘要】:在实际测试中,可用单一的辣椒素作标样来定性和定量其他各个辣椒碱。把所有的结果相加即为辣椒总碱的含量。测试步骤①标准液的配制:称取10 mg辣椒素,转入100 m L容量瓶中,加甲醇溶解,定容,摇匀。若样品是辣椒或辣椒粉,称取相当于含有10 mg辣椒素的样品,转入200 mL容量瓶中,加入90 m L醋酸钠饱和了的95%乙醇溶液,放入60℃水浴中,用磁棒搅拌5 h。

辣椒总碱包括辣椒素(capsaicin)、降二氢辣椒碱(nordihydrocapsaicin)、二氢辣椒碱(dihydrocapsaicic)、高辣椒碱(homocapsaicin)和高二氢辣椒碱(homodihydrocasaicin)。

用反相色谱C18柱可以分离及定量测试这5个化合物。按照非极性强弱来判断出峰时间,应该是直链碳链最短的降二氢辣椒碱先出峰,然后是辣椒素、二氢辣椒碱、高辣椒碱和高二氢辣椒碱。知道出峰的次序,再根据峰的紫外光谱,就可以判断是哪个辣椒碱了。从上面的分子结构可以看出,所有辣椒碱的分子结构都很相似,所以它们的紫外光谱及紫外吸收的灵敏度也很相似。在实际测试中,可用单一的辣椒素作标样来定性和定量其他各个辣椒碱。最后将计算得到的每个辣椒碱的含量用相对分子质量的比例来校正,就可得到准确的结果。把所有的结果相加即为辣椒总碱的含量。

(1)测试步骤

①标准液的配制:称取10 mg辣椒素,转入100 m L容量瓶中,加甲醇溶解,定容,摇匀。如需要,可进一步用甲醇稀释。

②样品液的配制:若样品是提取物或含有提取物的产品,称取相当于含有10 mg辣椒素的样品,转入100 m L容量瓶中,加入10 mL水,超声10 min,加入50 mL乙醇,再超声5 min,冷却后加入甲醇至刻度,摇匀后取10~20 mL至离心管中,离心5 min,取清液即可注射。如必要可用甲醇稀释后再注射。

若样品是辣椒或辣椒粉,称取相当于含有10 mg辣椒素的样品,转入200 mL容量瓶中,加入90 m L醋酸钠饱和了的95%乙醇溶液,放入60℃水浴中,用磁棒搅拌5 h。冷却后加入10 m L甲醇,摇匀,离心。取上层清液可直接注射,如需要也可稀释后再注射。

(2)HPLC条件

色谱柱:Phenomenex Luna C18(2),5μm 4.6×250 mm,100 A

流速:1.0 m L/min

注射量:10μL

UV波长:282 nm

移动相A:水

移动相B:乙腈

移动相C:甲醇

梯度:(25 min结束)

(3)结果计算

A:辣椒素标准品的峰面积

A:样品液中相应的辣椒碱的峰面积

V:样品液的总体积(m L)

V:标准液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :辣椒素标准品的质量(mg)

Rw/w:被测物的相对分子质量/辣椒素的相对分子质量

总辣椒碱的含量为所有测到的辣椒碱的总和。