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2023-06-28
银杏黄酮检测方法优化
【摘要】：银杏黄酮一般都是以黄酮苷的形式存在于银杏叶或提取物中。黄酮类苷数量很多，要定量测试每一种黄酮苷工作量很大，而且标准品也不容易找到，所以本方法是采用酸水解法将黄酮苷水解成糖和黄酮，后用色谱法来定量以上3种黄酮苷元，然后用平均转换系数来计算黄酮苷的总量。
银杏黄酮一般都是以黄酮苷的形式存在于银杏叶或提取物中。主要有3类黄酮苷：槲皮素苷、山柰素苷和异鼠李素苷。黄酮类苷数量很多，要定量测试每一种黄酮苷工作量很大，而且标准品也不容易找到，所以本方法是采用酸水解法将黄酮苷水解成糖和黄酮，后用色谱法来定量以上3种黄酮苷元，然后用平均转换系数来计算黄酮苷的总量。
从以上结构式可以看出这3个分子的羟基数及甲氧基数不一样，可以用C18柱来分离。
（1）测试步骤
①标准液的配制：准确称取15 mg槲皮素苷、15 mg山柰素苷、5 mg异鼠李素苷，转移至100 mL容量瓶中，加入40 m L甲醇，超声5 min，再加入甲醇至刻度，摇匀即可注射。
②样品液的配制：称取约含有70 mg总黄酮苷的提取物样品或5 g银杏叶粉，转移至250 mL回流瓶中，加20 mL水和50 m L乙醇，超声10 min；加入8 mL浓盐酸和小旋转磁棒，在100℃的水浴中用磁棒搅拌2 h；冷却后将液体转移至100 mL容量瓶中，用水冲洗回流瓶，将洗液转移入容量瓶，定容，摇匀。用0.45μm的过滤纸过滤溶液，收集滤液至2 m L HPLC注射瓶中，待注射。
（2）HPLC条件
色谱柱：Waters Symmetry C18，3.5μm，4.6×150 mm
流速：1 mL／min
注射量：10μL
波长：270 nm
柱温：35℃
移动相：甲醇、0.5%磷酸水溶液（47∶53）
（3）结果计算
A样：样品的峰面积
A标：标准品的峰面积
C标：标准溶液的浓度（mg／m L）
W 样：样品的质量（mg）
黄酮转换成黄酮苷的转换率：
槲皮素苷=756.3／302.2=2.504
山柰素苷=740.7／286.2=2.588
异鼠李素苷=770.6／316.2=2.437
以上3个黄酮苷的总和为总黄酮苷。
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2023-07-02
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