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叶黄素和玉米黄质的测试方法:简述和注意事项

【摘要】:叶黄素和玉米黄质是天然存在的一对共存体。叶黄素和玉米黄质在色谱中可用C30或苯基固定相加以分离,从而可以准确地进行定量分析。如样品中的叶黄素和玉米黄质是微型造粒的,首先要按照制造商提供的萃取方法来萃取样品中的叶黄素和玉米黄质。由于叶黄素和玉米黄质的分子结构相似,紫外光谱高度一致,所以可以用两者的峰面积之比来计算各自的含量。

叶黄素和玉米黄质是天然存在的一对共存体。

叶黄素和玉米黄质在色谱中可用C30或苯基固定相加以分离,从而可以准确地进行定量分析。

(1)测试步骤

样品和标准品溶液的配制按前述类胡萝卜素样品溶液和标准溶液的配制步骤进行。如样品中的叶黄素和玉米黄质是微型造粒的,首先要按照制造商提供的萃取方法来萃取样品中的叶黄素和玉米黄质。标准液和样品液的浓度最好在5 ppm 左右。

(2)色谱条件

色谱柱:Acquity Phenyl,1.8μm,2.1×150 mm

移动相A:0.1%磷酸水溶液

移动相B:0.1%磷酸乙腈溶液

流速:0.50 mL/min

柱温:45℃

UV检测波长:475 nm

注射量:2μL

梯度

图2-13 UPLC色谱图(用苯基柱分离叶黄素和玉米黄质)

(3)结果计算

A:叶黄素标准液的峰面积

A:样品中叶黄素的峰面积

V:样品液的总体积(m L)

V:标准液的总体积(m L)

W :样品的质量(mg)

W :叶黄素标准品的质量(mg)

w:叶黄素标准品的纯度(%)A:玉米黄质标准液的峰面积A:样品中玉米黄质的峰面积V:样品液的总体积(m L)V:标准液的总体积(m L)W :样品的质量(mg)W :玉米黄质标准品的质量(mg)w:玉米黄质标准品的纯度(%)

实际上叶黄素和玉米黄质往往共存于同一标准品中。由于叶黄素和玉米黄质的分子结构相似,紫外光谱高度一致,所以可以用两者的峰面积之比来计算各自的含量。比如叶黄素和玉米黄质标准品的纯度90%,玉米黄质的峰面积和叶黄素峰面积之比为1∶19,那么标准品中玉米黄质的含量为90%×0.05=4.5%,叶黄素含量为90%×0.95=85.5%。