主要有效成分是黄连碱和黄连素。从以上分子结构式可以看出黄连碱和黄连素都是碱性化合物，为了得到较好的峰形及较长的保留时间，本方法用己烷基磺酸钠作为离子对加入移动相中。测试步骤①标准液的配制：分别准确称取5 mg黄连碱和黄连素标准品，转入100 mL容量瓶中，加入60 m L甲醇，超声至标准品全部溶解，再加入甲醇至刻度，摇匀后即可注射。总生物碱为黄连碱与黄连素之和。......
2023-07-02
β-胡萝卜素的测试方法详解
【摘要】：β-胡萝卜素在人体中可转化成维生素A。全反式β-胡萝卜素是生物活性最强的一种异构体，但在光和热的作用下能转化成顺式的β-胡萝卜素，从而降低活性。在色谱测试过程中，要把这些异构体从全反式β-胡萝卜素中分离出去。由于β-胡萝卜素标准品不稳定，所以每次测试时都必须校正它的纯度。②样品溶液的配制：准确称取一定量含有约1 mgβ-胡萝卜素的样品。此方法来自AOACβ-胡萝卜素测试方法验证过程中用到的system 2方法。
β-胡萝卜素在人体中可转化成维生素A。全反式β-胡萝卜素是主要的存在形式，另外还有9-顺式、11-顺式、13-顺式和15-顺式β-胡萝卜素。全反式β-胡萝卜素是生物活性最强的一种异构体，但在光和热的作用下能转化成顺式的β-胡萝卜素，从而降低活性。α-胡萝卜素不能转化成维生素A，所以生物活性与β-胡萝卜素不同，但结构与β-胡萝卜素类似。
在色谱测试过程中，要把这些异构体从全反式β-胡萝卜素中分离出去。C30和有些苯基的色谱柱能把每个异构体分开，C18柱能把全反式β-胡萝卜素与其他异构体分离开，但不能把每个异构体单独分开。
（1）测试步骤
①标准液的配制：准确称取20 mgβ-胡萝卜素标准品，转移至100 mL容量瓶中，加入约20 mL氯仿来溶解β-胡萝卜素标准品，待溶解后加入异丙醇稀释至100 mL，摇匀避光，待用。
准确移取1 mL以上原始液至100 mL容量瓶中，加异丙醇定容，摇匀，可直接注射。
由于β-胡萝卜素标准品不稳定，所以每次测试时都必须校正它的纯度。校正方法见第1章“1.3样品及标准溶液的配制”（P18第2段）。
②样品溶液的配制：准确称取一定量含有约1 mgβ-胡萝卜素的样品。转入100 m L容量瓶中。
假如样品是固体粉末状，按如下步骤操作：在容量瓶中加入少量70℃热水（不超过10 m L），与样品混合，在70℃的水浴中保持15 min，加入30 m L IPA，在70℃的水浴中超声并不时摇动，持续10 min。然后加入25 mL氯仿，超声摇动10 min。冷却至室温，再加IPA至刻度，摇匀后过滤或离心，取清液再用IPA 稀释10倍，摇匀后即可注射。
假如样品是油状的液体，按如下步骤操作：加入10 m L IPA至容量瓶中，在70℃的水浴中超声2 min，超声同时多加以摇动。再加入25 m L氯仿，在水浴中超声10 min，同时经常摇动，再加IPA 至刻度，摇匀后过滤或离心，取清液，用IPA稀释10倍，摇匀后即可注射。
假如样品中β-胡萝卜素的原料是造粒处理的，按第1章“1.3样品及标准溶液的配制”（P17第6段）来进行样品准备。
样品准备的步骤可根据具体的样品及被测物进行适当的调整。
（2）色谱条件
①HPLC条件
色谱柱：Phenomenex Synergi，5μm，4.6×250 mm
流速：1 mL／min
注射量：20μL
柱温：室温
移动相A：甲醇
移动相B：乙醇
UV检测波长：450 nm
梯度：
②UPLC条件
色谱柱：Waters Acquity BEH Phenyl，1.7μm，2.1×150 mm
流速：0.5 mL／min
注射量：2μL
移动相：乙腈
UV检测波长：450 nm
检测时间：12 min
以下再介绍一个用C30柱的方法，该方法耗时较长，一次注射要1个小时，但在有某些特别需求时可以使用。此方法来自AOACβ-胡萝卜素测试方法验证过程中用到的system 2方法。
色谱柱：YMC-Pack C30，5μm，4.6×250 mm
注射量：20μL
柱温：30℃
移动相A：900 m L甲醇+20 mg维生素C+100 mL甲基叔丁基醚（MTBE）
移动相B：甲基叔丁基醚（MTBE）
UV检测波长：445 nm
梯度：
图2-11 β-胡萝卜素C30的色谱图
BCA是β-胡萝卜素；ACA是α-胡萝卜素
（3）结果计算
这里1 mgβ-胡萝卜素：1 667 IU
A样：样品的峰面积
A标：标准品的峰面积
W 标：标准品的质量（mg）
W 样：样品的质量（mg）
V样：样品溶液的总体积（mL）
V标：标准溶液的总体积（m L）
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2023-07-02
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2023-07-02
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2023-07-02
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2023-07-02
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2023-07-02
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2023-06-27
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2023-07-02
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