维生素B12有4种形式：维生素B12、甲基维生素B12、羟基维生素B12和酶维生素B12。图2-2水溶性维生素色谱图从图中可以看到加了离子对后碱性的化合物保留时间大大延长了，而且出峰的次序也发生改变。标准溶液的配制：准确称取维生素B1、维生素B6、烟酸及烟酰胺各10 mg，30 mg维生素B5标准品，转入100 m L容量瓶，加入60 mL溶液A，放入水浴超声器超声3 min。......
2023-07-02
维生素E的测试方法优化
【摘要】：另外，从维生素E的分子结构可以看到分子中有3个手性中心，最多有8个立体异构体。纯维生素E的原料可以通过测试旋光度来确定是天然的还是合成的。手性柱可能可以分离其中一部分立体异构体，但由于手性柱的柱效没有C18或苯基柱高，所以在具体样品中即使用手性柱也未必能把这些维生素E的立体异构体同其他的化合物或干扰物分开。Waters研究人员曾用二氧化碳高临界色谱仪把维生素E的部分立体异构体分开。
维生素E同样有3种形式：维生素E、维生素E醋酸酯和维生素E琥珀酸酯。同样，这3种标准品也可以在Sigma或其他公司买到，而且在色谱中很容易分离，所以不必把样品先水解后再测试。
另外，从维生素E的分子结构可以看到分子中有3个手性中心，最多有8个立体异构体。天然的维生素E只有RRR一种立体结构，叫d-维生素E；而合成的维生素E含有所有8个立体异构体，如RSR、SSR等叫dl-维生素E。
d-维生素E的生物活性要高于dl-维生素E，也就是天然维生素E的活性高于合成的维生素E。纯维生素E的原料可以通过测试旋光度来确定是天然的还是合成的。但在成品混合物中用旋光仪则无法鉴别天然的还是合成的。用C18或苯基色谱柱无法分离和区别这些立体异构体。手性柱可能可以分离其中一部分立体异构体，但由于手性柱的柱效没有C18或苯基柱高，所以在具体样品中即使用手性柱也未必能把这些维生素E的立体异构体同其他的化合物或干扰物分开。
如不能区别天然的还是合成的维生素E，就无法准确地算出维生素E的活性国际单位IU（international unit），而保健品上的标签一般都是用IU 来标示，所以怎样把测试到的毫克维生素E转换成IU，这是一个难解决的问题。
Waters研究人员曾用二氧化碳高临界色谱仪把维生素E的部分立体异构体分开（图2-9）。我们不一定要定量每个立体异构体，从下图可以看到这个样品不是纯的RRR型，而是各种立体异构体的混合物，所以不是天然的而是合成的维生素E。
图2-9 二氧化碳高临界色谱仪所测的合成维生素E色谱图
（1）测试步骤
维生素E的样品准备可按第1章“1.3样品及标准溶液的配制”操作。为了有效地从样品中萃取油溶性的维生素，建议整个萃取过程在70℃的水浴条件下进行。先将样品与少量的热水（70℃）充分混合，在70℃水浴条件下浸泡15 min，然后加入乙醇或异丙醇，保持70℃水浴超声15 min。水的比例不要超过10%。冷却后用有机溶剂定容，摇匀后过滤或离心取清液准备注射。
标准溶液和样品溶液的建议浓度为5 ppm 左右。样品准备的条件要根据具体样品和被测物而进行必要的调节。
（2）色谱条件
①HPLC条件
色谱柱：Phenomenex Synergi，5μm，4.6×250 mm，100 A
注射量：20μL
流动相A：甲醇
流动相B：乙醇
流速：1.0 mL／min
柱温：35℃
UV检测波长：285 nm
梯度：
②UPLC条件
色谱柱：Acquity UPLC®BEH C18，1.7μm，2.1×150 mm
注射量：2μL
UV检测波长：285 nm
流动相A：0.1%磷酸水溶液
流动相B：0.1%磷酸乙腈溶液
流速：0.5 mL／min
柱温：55℃
梯度：
（3）结果计算
A样：样品的峰面积
A标：标准品的峰面积
W 标：标准品的质量（mg）
W 样：样品的质量（mg）
V样：样品液的总体积（m L）
V标：标准液的总体积（m L）
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2023-07-02
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2023-07-02
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