在食品中（如水果、饮料等）水溶性维生素含量很低的情况下，也可以用LC-MS／MS来测试所有的水溶性维生素。MS／MS对所有水溶性维生素灵敏度都很高。
（1）测试步骤
①溶液的配制
溶液A（样品和标准样品溶液的配制溶液）：在950 mL去离子水中加入50 m L乙腈，再加入2 m L磷酸，摇匀即可。保存期3个月。
溶液B（流动相A）：0.1% 甲酸水溶液，水浴超声10 min。
溶液C（流动相B）：0.1%甲酸乙腈溶液。
②标准溶液的配制：同P34。
标准品的建议浓度：维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B5、烟酸和烟酰胺为20 ppb；叶酸、生物素和维生素B12为2 ppb。
③样品溶液的配制：同P34。
若要测试叶酸，可用p H 为11的溶液来单独配制样品溶液。
（2）色谱条件及MS／MS参数
①UPLC条件
色谱柱：Waters Acquity UPLC HSS Ts C18，1.8μm，2.1×150 mm
注射量：1μL
流动相A：0.1% 甲酸水溶液
流动相B：0.1% 甲酸乙腈溶液
流速：0.4 m L／min
柱温：45℃
梯度：
②MS／MS参数（来自Waters UPLC-MS／MS TQS仪器）
图2- 5、图2-6分别是水溶性维生素的LC-MS／MS的TIC色谱图、离子对质谱图。
图2-5 水溶性维生素（从上至下分别为维生素B2、B1、B5、B6，烟酸，烟酰胺）的LC-MS／MS的TIC色谱图
（3）结果计算
结果计算按第1章“LC-MS／MS的定性和定量测试”的步骤来进行。
美国FDA把黄曲霉毒素B1、黄曲霉毒素B2、黄曲霉毒素G1和黄曲霉毒素G2的总量的检测极限设在20 ppb，这是很有挑战性的。这么低的测试极限用LC-MS／MS方法可以实现。所以这4个分子用C18反相柱是可以分开的，尽管MS／MS对分离的要求不是很高。标准溶液的浓度见表3：表3黄曲霉毒素标准溶液浓度②样品溶液的配制：称取2 g样品，转移入50 m L容量瓶中，加入20 m L甲醇，振荡2 min，超声20 min。结果计算参照第1章“LC-MS／MS的定性和定量测试”。......
2023-07-02
LC-MS／MS检测器可满足这方面的测试要求。测试步骤①标准液的配制：分别称取20 mg维生素D2、维生素D3和维生素K1标准品，转移至100 mL容量瓶中，加入约60 mL乙醇，待所有的标准品溶解后，加入乙醇至刻度，摇匀待用。再进一步稀释5倍、25倍和125倍，得到大约200 ppb、40 ppb和8 ppb的维生素D2、维生素D3、维生素K1，以及100 ppb、20 ppb和4 ppb的维生素K2标准溶液。......
2023-07-02
通常在保健品的配方中维生素B12、生物素和叶酸的含量都是微克级，在样品准备过程中为了有效萃取待测化合物，降低干扰成分，通常最后的浓度是ppb级的，一般用LC／UV 比较难检测，所以建议用LCMS／MS来测试。现代的MS／MS检测极限对以上3个化合物都能达到ppb级。生物素：维生素B12：图2-4为维生素B12和生物素的LC-MS／MS的色谱图。图2-4维生素B12（上）和生物素（下）的TIC色谱图结果计算按第1章“LC-MS／MS的定性及定量测试”步骤来进行。......
2023-07-02
维生素B12有4种形式：维生素B12、甲基维生素B12、羟基维生素B12和酶维生素B12。图2-2水溶性维生素色谱图从图中可以看到加了离子对后碱性的化合物保留时间大大延长了，而且出峰的次序也发生改变。标准溶液的配制：准确称取维生素B1、维生素B6、烟酸及烟酰胺各10 mg，30 mg维生素B5标准品，转入100 m L容量瓶，加入60 mL溶液A，放入水浴超声器超声3 min。......
2023-07-02
再加上HPLC的保留时间进一步提高了确定性。MS／MS检测器的灵敏度很高，比较先进的质谱仪对维生素B12和生物素及其他一些化合物的最低检测极限都可以达到ppb水平。移动相中加入离子对试剂后，质谱仪的灵敏度会大幅度地下降，使痕量测试成为不可能。......
2023-07-02
维生素D3的前驱物是维生素D3合成过程中的中间体，现在多把维生素D3的前驱物当作总维生素D3的一部分，所以在测试总维生素D3时也应该包含维生素D3的前驱物。维生素D2、D3和D3的前驱物的分子结构比较接近，所以比较难分离，但如果梯度调节好的话也可以把这3个化合物完全分开。为了有效地从样品中萃取脂溶性维生素，建议整个萃取过程在70℃的水浴条件下进行。水的比例不要超过10%。......
2023-07-02
另外，由于过量饮酒造成维生素B1的亚临床缺乏者亦为数不少。生长期青少年、妊娠期妇女、哺乳期妇女、重体力劳动者、高温环境下生活及工作者，或是患慢性腹泻、消耗性疾病时，应注意增加维生素B1的摄入量。单纯的维生素B2缺乏很少见，通常是多种营养素联合缺乏。维生素B2缺乏也可影响其他营养素的摄取和利用。在发展中国家，植物性食物是膳食维生素B2的主要来源。......
2023-07-15
维生素K1、K2、K3由于分子式不同，所以很容易被分开。但是维生素K1和K2有反式和顺式之分，而顺式维生素K1、K2被认为是没有活性的，所以在测试过程中必须把顺式维生素K1和K2从反式维生素K1、K2中分离出去。测试步骤测试维生素K的样品准备可按第1章“1.3样品及标准溶液的配制”操作。为了有效地从样品中萃取油溶性维生素，建议整个萃取过程在70℃的水浴条件下进行。水的比例不要超过10%。......
2023-07-02
相关推荐