样品和标准溶液的配制方法

2023-07-02 理论教育版权反馈

【摘要】：测试软胶囊或其他油基样品中水溶性的成分，不能简单地直接用水来萃取。维生素B12一般用水萃取，但假如用水做溶剂，色谱会受到干扰，可以换用甲醇或乙醇来萃取样品中的维生素B12。下次用时假如峰面积比例不变，说明标准品的原始溶液是稳定的，可以继续使用；若峰面积的比例超出控制范围，则应停止使用，须重新配制新的原始标准溶液。

保健品的品种及形式多样，还有各种不同的剂型，如液体、片剂、胶囊、软胶囊，还可能存在于食品及饮料中，所以样品的处理及准备也比较复杂，但最终的目的就是要把样品中的被测物质全部、完全地萃取或溶解在测试溶剂中。

一般情况下，如果被测物是水溶性的，就用水做溶剂来萃取被测物；如果被测物是油溶性的，就用有机溶剂来萃取。但对一些特殊的样品，就要做一些调整。

（1）测试软胶囊或其他油基样品中水溶性的成分，不能简单地直接用水来萃取。因为水与油是互不溶的。用水萃取是异相萃取，效率低而且很难把所有的被测成分全部萃取到水中。所以应该先将少量的能与水互溶的有机溶剂（如甲醇、乙醇等）加到油质的样品中，然后加水萃取。实验证明这样做能把被测物全部萃取到溶液里。

（2）测试固体粉末中的油溶性物质，不能直接用有机溶剂萃取，因为许多油溶性的物质可能被吸附或包裹在亲水性的物质（如淀粉等）中。有机溶剂很难浸润到这些亲水性载体中，所以很难把被测物全部溶解出来。应该先加一点温水把这些亲水性的物质化开，然后加有机溶剂萃取。

（3）保健品中有些成分会相互反应，比如三价铁能使维生素C发生氧化，金属离子能与一些有机分子形成络合物等，所有这些反应都会影响最后的测试结果。为了保护被测分子在样品准备过程中不被氧化或不被络合，可以加入一些保护剂。保护剂可以是还原剂，防止被测成分被氧化，常用的还原剂有硫代硫酸钠、维生素C等。另外，在保护剂中还可以加入一些较强的络合配位体（如EDTA等），以保护被测分子不被络合。

（4）改用不同的萃取溶剂以减少干扰物。维生素B12一般用水萃取，但假如用水做溶剂，色谱会受到干扰，可以换用甲醇或乙醇来萃取样品中的维生素B12。因为维生素B12既可溶解于水，也可溶解于甲醇，但有些干扰物可能只溶于水而不溶于甲醇，以此来排除干扰物。

（5）有些化合物不稳定，如胡萝卜素类的化合物会分解。为了延长产品的有效期，制造商会把这些化合物进行造粒处理，就是用明胶等物质把这些不稳定的成分包裹起来做成微小颗粒使其与外界隔离。这样处理过的原料很稳定，在测试过程中必须把这些小颗粒打破，才能把有效成分萃取出来，否则有效成分是测不到的。比较合理的造粒应该用明胶做原料，在测试时可用菠萝蛋白酶来酶解明胶，让有效成分暴露出来，然后用合适的溶剂来萃取。一般在37℃的条件下，1小时可以完成酶解。然而不是所有的造粒都用明胶做原料，有些产品是用淀粉或变性淀粉做原料，有些是用蜡做原料。不同原料、不同工艺生产出的微粒，其破解方法也不同，有些用酶来破解，有些需要用DMSO 来破解，有些甚至要用强酸或强碱加高温来破解（这类保健品的生物活性很值得怀疑，这类产品有待政府有关部门建立一套生产标准及测试标准以保证产品的有效性及测试的规范化）。目前遇到这类样品，首先要求厂方提供破粒的方法，否则会给测试工作带来很多不便。

（6）标准样品的配制方法原则上应与样品配制的方法一样。对一些不稳定的化合物，在配制溶液前应先标定纯度。以叶黄素为例：首先用规定的溶剂配成溶液，测量溶剂的紫外吸收强度，用紫外吸收系数来换算溶液的浓度。接下来再测液相色谱，得出色谱的纯度。最后用紫外光谱测到的浓度乘以色谱纯度，就可以得到标准样品的纯度。

另外，有些标准品价格非常昂贵，不可能每次测试都配新的标准溶液，可以适当地保存它们的原始溶液，以待以后继续使用。为了确保原始溶液的稳定性，可在原始溶液中加入合适的稳定的化合物作为参照物，测液相色谱并记下标准品的峰面积和参照物峰面积，算出两个峰面积的比例。下次用时假如峰面积比例不变，说明标准品的原始溶液是稳定的，可以继续使用；若峰面积的比例超出控制范围，则应停止使用，须重新配制新的原始标准溶液。

样品和标准溶液的配制方法

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