如何模拟生产病毒灭活液？

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：（一）病毒培养1.病毒接种10～11日龄健康鸡胚尿囊腔接种三级种子批病毒。详细记录鸡胚生长情况、24 h内死亡的鸡胚数。通过灭活验证试验和细菌内毒素含量测定等方法确定并记录病毒灭活效果。检测并记录浓缩后病毒的效价。测定并记录游离甲醛、硫柳汞以及血凝素含量。

（一）病毒培养

1.病毒接种

10～11日龄健康鸡胚尿囊腔接种三级种子批病毒。首先检视鸡胚，判断鸡胚状态；接着开启工作种子，以无菌方式取0.1 mL病毒液接种于健康鸡胚的尿囊腔；之后于37℃孵卵器孵育72 h，孵育期间每天检查鸡胚生长情况，24 h内死亡的鸡胚应弃去。详细记录鸡胚生长情况、24 h内死亡的鸡胚数。

2.收获病毒

收获前将鸡胚置4℃冰箱过夜或至少放置4 h，用75%乙醇消毒气室处卵壳，并用无菌镊子除去气室处卵壳，切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜，翻开到卵壳边上。用无菌吸管吸取鸡胚尿囊液置于收集管中，合并单次收获的尿囊液。记录单次和合并收集的尿囊液的量。

3.病毒灭活

合并的尿囊液中加入终浓度不高于200 μg/mL的甲醛溶液，于2～8℃灭活病毒7～10 d。通过灭活验证试验和细菌内毒素含量测定等方法确定并记录病毒灭活效果。

（二）病毒的浓缩、纯化与除菌过滤

1.浓缩

采用超滤方法浓缩灭活的单价病毒液，浓缩后的病毒液血凝效价应不低于1∶10240。检测并记录浓缩后病毒的效价。

2.纯化

采用蔗糖密度梯度离心法对超滤浓缩的病毒液进行纯化，并结合超滤法去除蔗糖。

3.除菌过滤

纯化后的病毒液经除菌过滤，可加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂，即为单价原液。

（三）半成品配制

根据各单价原液的血凝素含量，分别按比例混合后，进行适当稀释，可补加适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂，继续搅拌至均匀，并控制游离甲醛含量不超过50 μg/剂，硫柳汞含量不高于50μg/剂，血凝素含量不低于15μg/（株·剂）。测定并记录游离甲醛、硫柳汞以及血凝素含量。留取检定用半成品样品，样品于2～8℃保存。

（四）成品制备

1.分装

半成品的分批应按照2010年版《中国药典》三部中“生物制品分批规程”的规定进行；流感全病毒灭活疫苗通常按照每瓶0.5 mL或1.0 mL的规格进行分装，并参照2010年版《中国药典》三部中“生物制品分装和冻干规程”的有关规定进行操作。

2.包装

产品的包装按照2010年版《中国药典》三部中“生物制品包装规程”进行。

（五）清场

严格检查生产、包装等工序的工作环境，应清洁且无上批遗留物；生产用具应严格消毒清洗并灭菌后备用；机器设备内外清洁、无物料痕迹和油垢；生产区域应无非生产用品等。详细填写清场记录单。

1.分析总结各生产步骤中的影响因素。

2.通过查阅2010年版《中国药典》三部，确定SPF鸡胚、种子批、半成品以及成品质量检测的具体项目和方法。