如何提高CHO细胞培养效率？

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：（一）动物细胞的培养基和培养条件为了使CHO细胞培养成功，必须保证以下基本条件：①所有与细胞接触的设备、器材和溶液都必须绝对无菌，避免细胞外微生物的污染；②必须有足够的营养供应，不可有有害的物质，避免即使极微量的有害离子的侵入；③有适量的氧气供应；④必须随时清除细胞代谢中产生的有害产物；⑤有良好的适于生存的外界环境，包括pH、渗透压和离子浓度；⑥及时分种，保持合适的细胞密度。CHO细胞一般用什么培养基培养？

（一）动物细胞的培养基和培养条件

为了使CHO细胞培养成功，必须保证以下基本条件：①所有与细胞接触的设备、器材和溶液都必须绝对无菌，避免细胞外微生物的污染；②必须有足够的营养供应，不可有有害的物质，避免即使极微量的有害离子的侵入；③有适量的氧气供应；④必须随时清除细胞代谢中产生的有害产物；⑤有良好的适于生存的外界环境，包括pH、渗透压和离子浓度；⑥及时分种，保持合适的细胞密度。

1.确定需要哪些仪器设备及药品。

2.动物细胞的培养条件包含哪些？请详细论述。

3.动物细胞培养基的种类和组成如何？各有何优缺点？CHO细胞一般用什么培养基培养？

（二）动物细胞培养的基本方法

1.细胞分离

为了进行细胞培养，首先要获得细胞，获得细胞的方法有两种，即离心分离和消化分离。

2.细胞计数

一般细胞分离制成悬液准备接种前必须进行细胞计数，再按需要接种到培养基或反应器中，细胞计数还用于观察细胞增长变化以及药物对细胞的作用等方面。目前细胞计数有两种，即自动细胞计数器计数和血球计数板计数（见图2-6-1）。

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图2-6-1　血球计数板示意图

3.细胞传代

随着培养时间的延长和细胞不断分裂，一旦细胞之间相互接触而发生接触性抑制，生长速度变慢甚至停止；另一方面，也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。此时就需要将培养物分割成小的部分，重新接种到另外的培养器皿（瓶）内，再进行培养。这个过程就称为传代（passage）或者再培养（subculture）。

4.细胞冻存和复苏

细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到细胞保种的作用。

冻存细胞要进行复苏，再培养传代。复苏细胞一般采用快速融化法。保证细胞外结晶快速融化，以避免慢速融化水分渗入细胞内，再次形成胞内结晶损伤细胞。在细胞复苏操作时，应注意融化冻存细胞速度要快，可不时摇动安瓿或冷冻管，使之尽快通过最易受损的温度段（-5～0℃）。这样复苏的冻存细胞存活率高，生长及形态良好。然而，由于冻存的细胞还受其他因素的影响，有时也会有部分细胞死亡。此时，可将不贴壁、飘浮在培养液上（已死亡）的细胞轻轻倒掉，再补以适量的新培养液，也会获得较为满意的结果。

1.确定需要哪些仪器设备及药品。

2.制定出细胞分离的详细步骤并实施。

3.自动细胞计数和血球计数板计数的优缺点如何？

4.讨论血球计数板计数的原则及计算公式，并用血球计数板计数。

5.制定出细胞冻存的具体步骤并实施，保证细胞密度在3×105～5×105个/mL，并在冻存管上做好标记。

6.制定出细胞复苏的具体步骤并实施，请查阅注意事项。

如何提高CHO细胞培养效率？

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