酶活力的测定与标准曲线制作

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：（二）固定化细胞的天冬氨酸酶活力的测定取相当于0.5 g天然细胞的固定化细胞，置于30 mL 1.0 mol/L延胡索酸铵溶液，37℃搅拌反应30 min，迅速过滤除去固定化细胞，分离反应液，经稀释后于240 nm波长处测定吸光度，计算延胡索酸残余量，并计算每克固定化细胞的酶表现活力。表2-5-1标准曲线的绘制根据测定的吸光度，作出标准曲线，得出回归方程。

（一）湿菌体天冬氨酸酶活力的测定

取0.5 g湿细胞悬浮于2 mL蒸馏水中，加入30 mL 1.0 mol/L延胡索酸铵溶液（含1 mmol/L MgCl2、1%Triton，pH 9.0），37℃搅拌反应30 min，煮沸终止反应，1200 r/min离心5 min，稀释反应上清液，于240 nm波长处测定吸光度，按延胡索酸（富马酸）残余量计算酶活力，一个酶活力单位定义为在测定条件下，每小时每克细胞转化生成1 μmol天冬氨酸所需的酶量。

（二）固定化细胞的天冬氨酸酶活力的测定

取相当于0.5 g天然细胞的固定化细胞，置于30 mL 1.0 mol/L延胡索酸铵溶液（含1 mmol/L MgCl2），37℃搅拌反应30 min，迅速过滤除去固定化细胞，分离反应液，经稀释后于240 nm波长处测定吸光度，计算延胡索酸残余量，并计算每克固定化细胞的酶表现活力。总活力用每克固定化细胞每小时内所产生的L-天冬氨酸的物质的量（μmol）表示（μmol/（h·g））。

（三）延胡索酸标准曲线的绘制

延胡索酸在240 nm波长处有特征吸收峰，在一定范围内吸光度与延胡索酸含量呈线性关系，且反应系统中无干扰。

按表2-5-1配制不同浓度的标准溶液，检测吸光度，记录于表中。

表2-5-1　标准曲线的绘制

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