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采用包埋法固定化细胞连续发酵

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：L-天冬氨酸的工业化生产主要采用天冬氨酸酶转化富马酸的方法。L-天冬氨酸酶可以利用大肠杆菌、三叶草假单胞菌、巨大芽孢杆菌或产氨短杆菌等发酵生产。其中包埋法是近年来发展迅速的一种新兴固定化细胞技术，它具有操作简单、对细胞活性影响较小、效率高等特点，是目前细胞固定化研究和应用最广泛的方法之一。因此，将高天冬氨酸酶活性的大肠杆菌固定于特定的包埋材料之中，装入固定化细胞柱连续生产L-天冬氨酸。

（一）生产工艺流程

查阅2010年版《中国药典》三部“流感全病毒灭活疫苗”部分（第159～161面），确定生产工艺流程，如图2-7-2所示。

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图2-7-2　流感全病毒灭活疫苗生产工艺流程

（二）流感全病毒灭活疫苗生产方案

（1）将标记好的健康鸡胚用75%乙醇消毒气室卵壳，用1 mL注射器注入0.1 mL病毒液。用石蜡封孔后于37℃孵卵器孵育72 h。孵育期间每天检查鸡胚生长情况，24 h内死亡的鸡胚应弃去。

（2）收获尿囊液。收获前将鸡胚置4℃冰箱过夜或至少放置4 h，用75%乙醇消毒气室处卵壳，并用无菌镊子除去气室处卵壳，切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜。用无菌吸管吸取鸡胚尿囊液置于收集管中。

（3）灭活。加入适宜浓度的甲醛溶液至病毒合并液中，于2～8℃灭活病毒7～10 d。

（4）浓缩。超滤浓缩灭活的单价病毒液，浓缩后的病毒液血凝效价应不低于1∶10240。

（5）纯化。超滤浓缩后的病毒液可采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法进行纯化。

（6）配制。根据各单价病毒原液血凝素滴度，分别按比例混合后，进行适当稀释，加入硫柳汞作为防腐剂，即为疫苗半成品。

（7）分装。检定合格的半成品进行分装。

（8）包装。

分析并讨论各生产步骤中应该注意的事项。