建立和保存菌种库和工作菌种库的任务

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：工作菌种库也可由上一代工作菌种库传出，但每次限传三代。原始菌种库、主代菌种库和工作菌种库于-70℃以下保存。（二）工作菌种库的建立及保存培养基制备。生产过程中使用的培养基均按一定工艺要求配制。种子罐培养结束后，无菌操作转移到离心管中，离心15 min，加新鲜菌种培养基，将菌体制成菌悬液，并加入甘油使其浓度达到18%，分装于Eppendorf管中，每支0.8～1.2 mL。

（一）菌种库的建立、传代及保存

从原始菌种库出发，传代、扩增后，冻干保存，作为主代菌种库，主代菌种库不得进行选育工作。从主代菌种库传代、扩增后，甘油管保存，作为工作菌种库。工作菌种库也可由上一代工作菌种库传出，但每次限传三代。每批主代菌种库均进行划线LB琼脂平板、涂片革兰氏染色、对抗生素的抗性、电镜检查、生化反应、干扰素的表达量、表达的干扰素型别、质粒检查等检定，合格后方可投产。原始菌种库、主代菌种库和工作菌种库于-70℃以下保存。

（二）工作菌种库的建立及保存

（1）培养基制备。生产过程中使用的培养基均按一定工艺要求配制。种子培养基的配料（参考）：1%蛋白胨、0.5%酵母提取物、0.5%氯化钠。

（2）接种、转移及培养。取12支工作菌种库或主代菌种库菌种接大摇瓶内，摇床培养，至吸光度值为4.5～6.5。将已培养好的摇瓶种子液转移至种子罐中，通入无菌空气，培养至吸光度值符合放罐要求（吸光度值为6.0～10.0）。种子罐培养结束后，无菌操作转移到离心管中，离心15 min，加新鲜菌种培养基，将菌体制成菌悬液，并加入甘油使其浓度达到18%，分装于Eppendorf管中，每支0.8～1.2 mL。

（3）保存。分装完毕，用封口膜封住管口，贴好标签，于-20℃冰箱放置16～20 h，在-70℃冰箱下可保存3年。

1.配制种子培养基。

2.确定如何取得一级种子并操作。

3.选择合适的方法保存菌种。

建立和保存菌种库和工作菌种库的任务

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