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实训项目：胆红素生产优化

2023-06-24 理论教育版权反馈

【摘要】：胆红素存在于人及多种动物胆汁中，是胆结石的主要成分之一，乳牛及狗胆汁中含量最高，猪及人胆汁次之，牛胆汁更次之。根据胆红素的性质，以动物胆汁为原料，采用生物化学制药技术制备胆红素。图1-7-7胆红素的生产工艺流程三、实训器材和试剂1.原料猪胆汁。评价所提取的胆红素的质量。

一、实训目标

（1）掌握胆红素的基本生产技术。

（2）掌握胆红素的质量检验方法。

（3）进一步熟悉相关仪器的使用方法。

二、实训原理

胆红素为二次甲胆色素，其分子式为C33H36N4O6，相对分子质量为584.65。胆红素存在于人及多种动物胆汁中，是胆结石的主要成分之一，乳牛及狗胆汁中含量最高，猪及人胆汁次之，牛胆汁更次之。名贵中药材天然牛黄（病牛胆囊、胆管及肝管中结石）中的胆红素含量一般在50%左右。

药用胆红素是人工牛黄的贵重原料，为游离型、淡橙色或深红棕色单斜晶体或粉末，加热逐渐变黑而不熔。干品较稳定。在碱液中或遇Fe3+极易被氧化成胆绿素，含水物易被过氧化脂质破坏。血清蛋白、维生素C及EDTA可提高其稳定性。游离胆红素溶于二氯甲烷、氯仿、氯苯及苯等有机溶剂和稀碱溶液，微溶于乙醇，不溶于乙醚及水。其钠盐溶于水，不溶于二氯甲烷及氯仿，其钙、镁及钡盐不溶于水。根据胆红素的性质，以动物胆汁为原料，采用生物化学制药技术制备胆红素。以猪胆汁为原料制备胆红素的生产工艺如图1-7-7所示。

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图1-7-7　胆红素的生产工艺流程

三、实训器材和试剂

1.原料

猪胆汁。

工业盐酸、氢氧化钙、氯仿、乙醇、乙醚、抗氧化剂。

3.仪器设备

耐酸锅、浓缩罐、真空干燥器。

四、实训过程

（1）制钙盐：取新鲜猪胆汁，加等体积的1%Ca（OH）2乳液，搅匀，迅速加热至90～97℃，保温10～15 min，过滤得钙盐。胆汁应保持新鲜，采集后冷冻存放且不可过久。加热至40℃即出现油脂物，可轻轻除去。所得钙盐可用热水冲洗一次，除去过量的碱及其他杂质。

（2）酸化：酸化程度主要与温度、浓度、酸度、时间等条件有关。一般取钙盐加10倍量以上水使分散均匀，加1%抗氧化剂，搅拌下（60 r/min）滴加盐酸（1∶2）。40 min内达pH2.0，pH保持不变为止。

（3）醇洗：将酸化胆红素室温下加10倍量乙醇，使其分散均匀，pH不应高于5，加0.5%抗氧化剂。搅匀，放置约1h即分层。去上层醇液，收集沉淀胆红素。

（4）水洗：将醇洗胆红素加50℃水冲洗，保温约5 min，收集漂浮胆红素，迅速加乙醇脱水，除去乙醇得胆红素粗品。

（5）提取：将胆红素粗品加10倍氯仿，50℃振摇10 min。如有必要可提取2～3次，残渣为灰白色即可。

（6）精制：将氯仿提取液减压蒸馏近干，此时出现大部分胆红素结晶，冷却至室温后加入乙醇，继续冷却至4℃，放置10 min，滤出胆红素晶体，用无水乙醇或乙醚处理后，真空干燥，即得胆红素精品。（除考虑介质、浓度、pH外，还注意胆红素结晶应在暗处进行。）

（7）质量检验：胆红素含量测定有重氮显色法及摩尔吸收系数法，以摩尔吸收系数法为例。

精密称取供试品10 mg，用少量分析纯氯仿研磨溶解，移入100 mL棕色容量瓶中，超声处理使溶解，迅速放冷，再加三氯甲烷稀释至刻度，摇匀。再精密量取该溶液5 mL于50 mL容量瓶中并定容至50 mL，摇匀，于450 nm波长处测定吸收度（A），依下式计算供试品中胆红素含量：

胆红素含量（%）=A×104.03

式中的104.03为胆红素相对分子质量（584.65）与其在氯仿中摩尔吸收系数（56200）之比值与10000的乘积。供试品按干燥品计算，含胆红素（C33H36N4O6）不得少于90.0%。

五、实训结果处理

（1）计算胆红素的提取率。

（2）评价所提取的胆红素的质量。